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利用重组NS4抗原及合成肽5-11抗原分别检测5例输血后丙型肝炎患者的系列血清136份,并与HCV总抗体及HCVRNA检测结果比较,发现抗NS4抗体的动态变化虽然有两种模式,但在多数情况下为一种模式,即抗体阳转后很少转阴,并且其动态变化基本与总抗体相似。同时发现2例病人抗NS4抗体阳转时间早于总抗体,因此,推测HCV检测试剂中增加NS4抗原可能对提高HCV诊断试剂的灵敏度有一定意义。 相似文献
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中国人丙型肝炎病毒全长NS3基因的克隆、序列分析及表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 为改进HCV试剂的质量克隆 1b型丙型肝炎病毒 (HCV)全长NS3基因并在原核细胞中表达。方法 用RT PCR方法从中国人血清中扩增全长NS3片段 ,进行序列分析 ,并克隆到pET3 0a(+)原核表达载体中 ,构建的原核表达载体pET NS3 180 0在大肠杆菌BL2 1(DE3 )中表达 ,用Westernblot方法进行验证。结果 扩增到 1b型HCV全长NS3片段 ,经Westernblot实验表明该片段具有抗原活性。结论 构建的质粒可在大肠杆菌中表达完整的NS3蛋白 相似文献
3.
目的研制第5套丙型肝炎病毒抗体诊断试剂国家参考品。方法从国内13省市几十万名供血员中筛选样品,用多种试剂对收集到的2000多份血样进行复检,从中选出317份样品,用国外3种抗-HCV EIA试剂及国内4种抗-HCVEIA试剂进行检测,对可能被选入参考品的样品,再用CHIRON公司抗-HCV RIBA确证试剂,HCV RNA PCR试剂和CHIRON公司HCV RNA TMA试剂进行了确证。利用HCV基因分型试剂对部分样品进行HCV基因型别检测,并对部分分型结果用核苷酸序列测定的方法确证。21个实验室会同标定。结果建立了第5套丙型肝炎病毒抗体诊断试剂国家参考品及相应的质量标准。结论自2004年10月1日起,第5套抗-HCV国家参考品已被国家有关部门批准正式使用。 相似文献
4.
目的评估不同化学发光免疫分析法的丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)抗体检测试剂性能。方法采用HCV抗体检测试剂(化学发光免疫分析法)行业标准验证方式,应用国内外市场占有较大份额及方法有代表性的9种试剂,对HCV抗体国家参考品的65份[HCV抗体阴性参考品30份(编号N1~30)、阳性参考品30份(编号P1~30)、最低检出限参考品4份(编号L1~4)和重复性参考品1份]血浆样本进行检测,通过分析HCV抗体检测试剂(化学发光免疫分析法)行业标准各项性能要求,评估不同化学发光免疫分析方法的HCV抗体试剂性能。结果 9种试剂检测阴、阳性参考品符合率均为96.7%(29/30)~100%(30/30),仅有3种试剂检测参考品符合率均为100%(30/30);最低检出限均检出L1、L2、L3阳性,检出L4阴性;重复性检测S/CO值的变异系数(CV)在1.6%~11.1%之间,化学发光免疫分析的双抗原夹心法比间接法试剂对同一阳性样本检测的S/CO值高;相同项目同一试剂的稳定性试验与常温条件下检测结果基本一致,对每种试剂检测3个批号的批间精密度,S/CO值的CV在2.3%~12.5%之间。结论 9种试剂对HCV抗体检测试剂(化学发光免疫分析法)行业标准各项指标验证显示,不同化学发光免疫分析法的HCV抗体检测试剂性能基本一致。 相似文献
5.
HIV-1 gag和env基因片段的构建及表达 总被引:1,自引:0,他引:1
为研究人免疫缺陷病毒(HIV-1)的分子生物学,发展艾滋病的诊断试剂,克隆了含HIV-1env和gag基因cDNA的质粒pUCF12。用PvuⅡ和HincⅡ降解pUCF12质粒,得到含部分p17、全部p24和全部p15基因的cDNA片段,用BglⅡ降解pUCF12质粒得到含有部分gp120和全部gp41的cDNA片段。将该两个片段分别亚克隆到表达载体PGex上,在pTac启动子的调控下,部分gag基因和env基因在大肠杆菌中表达.在SDS-PAGE中,GST+gag融合蛋白呈现一条约70kD的染色带,其表达水平约占菌体总蛋白的18%.而GST-env蛋白则呈现一条约65kD的蛋白带,该表达蛋白约占菌体总蛋白的15%。经免疫印迹分析,该两种表达产物可分别与抗-P24和抗-gP41的单克隆抗体反应,用Abbott试剂也证明为HIV-1抗原蛋白。 相似文献
6.
目的 构建HCV聚合酶基因重组原核表达质粒 ,研究高效表达聚合酶蛋白的最适条件、表达产物的纯化方法以及最佳变性和复性条件 ,同时分析其二级结构 ,为建立细胞外HCV聚合酶复制模型及筛选药物创造条件。方法 采用高保真PfuDNA聚合酶进行反转录及套式PCR扩增 ,从我国HCVRNA阳性病人血清中扩增出HCVNS5bRNA聚合酶全长基因序列 ,构建原核表达载体。在多个载体中选取pET 30a作为表达载体 ,选择诱导表达条件。利用Ni2 + 金属离子螯和亲和层析将其纯化。同时对该酶蛋白的变性和复性条件进行研究 ,对其相关的分子生物学参数和二级结构进行分析。结果 测序及读码框架分析结果表明 ,按照上述技术路线得到了相关HCVNS5bRNA聚合酶全基因序列。在最佳表达条件下 ,诱导表达融合蛋白 (相对分子质量 6 5 0 0 0 ) ,其最高表达量为18 9% ,纯度大于 92 83% ,Westernblot法检测 ,能与HCVNS5b单抗反应 ,证明其为NS5b蛋白。对其二级结构的分析表明 ,已获得了活性基团完整的HCV聚合酶。结论 HCV聚合酶的高效表达和纯化 ,为建立细胞外HCV聚合酶复制模型及筛选药物奠定基础。 相似文献
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部分国产HCV抗原的质量分析 总被引:7,自引:0,他引:7
为了改进国产丙型肝炎抗体试剂的质量,在建立第三代国家丙型肝炎抗体试剂参考品时,对国内现有丙型肝炎抗体试剂及试剂用抗原进行研究。用国内外不同试剂检测丙型肝炎CORE,NS3和NS5抗原,结果表明我国对现有丙型肝炎抗体试剂及试剂用抗原应加强研究,尤其应加强对NS3、NSS抗原的研究,使我国成品试剂尽快达到国外第三代丙型肝炎抗体试剂的水平。 相似文献
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乙型肝炎疫苗和抗病毒药物在全球的广泛应用有效地防止了乙肝病毒(HBV)的感染。但随之而来的问题是在疫苗免疫后的人群、进行抗病毒治疗的患者以及慢性HBV感染的人群中,出现了HBV表面抗原的变异,而大量文献报道了免疫诊断试剂对变异表面抗原的漏检。本文对乙肝病毒表面抗原变异对免疫诊断试剂检测结果的影响作一综述。 相似文献
9.
病毒基因检测技术的发展趋势 总被引:2,自引:0,他引:2
病毒主要由核酸及蛋白质组成,病毒的核心是核酸。检测到病毒核酸的存在是证明病毒感染的直接指标。本文简要介绍了病毒基因检测技术,尤其是PCR技术和基因芯片技术的研究进展。 相似文献
10.
丙型肝炎病毒抗体诊断试剂的质量检测 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 了解丙型肝炎病毒 (HCV)抗体酶联免疫诊断试剂反应时间与灵敏度及特异性的关系。方法 用丙型肝炎病毒抗体酶联免疫诊断试剂对阴、阳性血清进行检测 ,在加入样品后的不同反应时间分别进行显色终止 ,波长 492nm下测A值。结果 加入样品后的反应时间影响丙型肝炎病毒抗体酶联免疫诊断试剂灵敏度 ,对特异性没有影响。加入样品后的 2 0~ 3 0min ,反应时间对灵敏度影响变化最大。结论 延长反应时间 ,可提高阳性样品特别是弱阳性样品的检出率 ,对阴性样品无明显影响。 相似文献