中国北方部分地区猪圆环病毒Ⅱ型分子流行病学调查

目的 分析中国北方部分地区猪圆环病毒Ⅱ型(Porcine circovirus type 2,PCV2)的分子流行病学特征。方法收集2006～2008年间北京、山西、山东、河北4省(市)PCV2 DNA阳性病料共16份,分别进行PCV2 ORF1和ORF2核苷酸序列的扩增、克隆和测序,并利用分子生物学软件进行分子遗传学分析。结果本研究中的16株PCV2 ORF1、ORF2核苷酸序列及推导的氨基酸序列与参考株的同源性分别为97.1%～99.8%和98.4%～99.7%及89.6%～99.4%和88.1%～99.1%;2006～2008年间中国北方与南方以及2002～2005年间北方的PCV2流行情况基本相似,绝大多数属于1AB基因亚群;近年来,中国北方流行的PCV2(1AB基因亚群)中,有11/14集中在单独一个侧枝;在中国北京出现了2C基因亚群的PCV2野毒株,经分析可能从欧洲国家引入。结论从基因水平来讲,PCV2 1AB基因亚群是目前最高效的疫苗株,但这种局面未来可能会发生改变。     

猪2型圆环病毒疫苗的研究进展

猪2型圆环病毒是引起猪圆环病毒病,如断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪呼吸疾病综合征、猪皮肤和肾病综合征等的重要病原体。该病毒可诱发多种病毒和/或细菌的混合感染和继发感染,给养猪业造成巨大的经济损失。近年来,国内外研究者都在致力于猪2型圆环病毒疫苗的研究开发。到目前为止,部分疫苗已在临床试验中取得成功,有的已投入应用,其他候选疫苗也正在积极研究过程中。本文就近年来国内外各类猪2型圆环病毒疫苗的研究进展及存在的问题和可能的解决办法作一综述。     

人β-hCG化学发光免疫分析方法的建立

目的建立一种检测人血清hCG浓度的双抗体夹心化学发光免疫分析方法。方法采用2种高特异性的抗β-hCG单克隆抗体,以一种包被微孔板制成固相抗体,另一种标记碱性磷酸酶,以金刚烷衍生物为底物,采用双抗体夹心法检测人血清hCG浓度,并与进口试剂进行比较。结果以5μg/ml单克隆抗体包被微孔板,酶结合物以1∶10000稀释,在室温条件下检测,可测范围为5~540mIU/ml,灵敏度为0.143mIU/ml,批内、批间平均变异系数分别为5.28%和7.05%,平均回收率为98.77%,范围为92.3%~108.6%,与TSH、FSH和LH的交叉反应率均小于0.01%。与国外同类试剂有良好的相关性。结论该方法有较高的灵敏度、精密性和准确性。     

人催乳素化学发光免疫分析试剂盒的制备及验证

目的制备人催乳素(hPRL)化学发光免疫分析(CLIA)试剂盒,并进行验证。方法采用2株不同结合位点的抗hPRL单克隆抗体,1株用于包被微孔板,另1株用于标记HRP,建立双抗体夹心检测系统,配合化学发光底物组装成试剂盒,并进行各项技术指标的验证。结果试剂盒最佳定量范围在5～100ng/ml,标准曲线的相关系数r=0.9999,灵敏度为0.49ng/ml,平均回收率为100.9%,试验内和试验间变异系数分别小于6.3%和10.9%。试剂盒有效期可达1年,特异性良好,出现Hook效应的样品浓度为1500ng/ml。与进口化学发光试剂盒和放射免疫分析试剂盒对比检测84份临床标本的结果呈高度相关,相关系数分别为0.9537和0.9486。结论已成功制备灵敏、特异的hPRLCLIA试剂盒,可用于人催乳素的临床检测。     

北京分离株Gassericin T基因的克隆、表达及活性检测

目的克隆格氏菌素T基因,在原核细胞中表达,并检测其抑菌活性。方法通过PCR技术,从3株L.gasseri北京分离株中特异性扩增格氏菌素T的成熟肽DNA编码片段(V11/gatA和V441/gatA),经TA克隆和序列测定后,进行同源比较分析。双酶切后的目的片段与表达载体pGEX6P1连接,得到高效融合表达质粒pGEXgatA/V11和pGEXgatA/V441,转化大肠杆菌BL21(DE3)PlysS,IPTG诱导表达,并检测表达产物的抑菌活性。结果目的蛋白以包涵体形式表达,表达量约29%。重组格氏菌素对于金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、痢疾志贺氏菌和伤寒沙门氏菌具有明显的抑制生长作用。结论所获得的重组格氏乳杆菌素具有明显的抑菌活性,有望成为新型抗菌素。     

化学发光免疫分析技术应用研究进展

本文介绍了化学发光免疫分析技术的基本原理、分类及其在兽医学、医学和食品分析上的应用研究进展。