从噬菌体表面展示肽库中筛选边缘无浆体膜表面蛋白5单克隆抗体识别的抗原表位

目的从噬菌体表面展示肽库中筛选边缘无浆体膜表面蛋白5(Membrane surface protein5,MSP5)单克隆抗体识别的抗原表位。方法用MSP5单克隆抗体1D8作为靶标,对噬菌体展示随机12肽库进行筛选,通过ELISA和竞争抑制ELISA鉴定筛选克隆的结合特性,并提取阳性克隆的单链DNA,进行测序分析。结果从表面展示随机肽序列的噬菌体文库中筛选到与MSP5单抗1D8特异结合的噬菌体克隆,其一致序列为LING。竞争抑制试验表明,含特异序列的克隆能与MSP5重组蛋白抗原竞争。结论初步确定MSP5单克隆抗体1D8的抗原表位为线性表位,为进一步研究其在边缘无浆体诊断及新型疫苗研制中的作用奠定了基础。     

丝状支原体丝状亚种SC型LppB基因的克隆与表达纯化

目的克隆丝状支原体丝状亚种SC型(MmmSC)LppB蛋白基因,并进行表达及纯化。方法通过PCR,扩增MmmSC标准株PG1的LppB全基因,克隆至pMD18-T载体上,并测序鉴定。同时选LppB基因中两个TGA之间903bp片段,与pET30a载体构建重组质粒,进行诱导表达,表达产物经Ni-NTA-His系统纯化。结果PCR扩增的LppB基因长度片段约1869bp,与预期大小相符。将其与NCBI上发布的Afade株、LC型代表株Y-goat和同属的Bovine7株的LppB基因序列相比较,同源性分别为99·8%、92·8%和76·7%,氨基酸同源性分别为99·2%、90·2%和67·0%。经Ni-NTA-His系统纯化,得到纯净的单一蛋白。结论已成功克隆了PG1的LppB蛋白基因,并进行了表达及纯化。     

丝状支原体丝状亚种SC型LppQ N-端基因表达与免疫原性

目的构建丝状支原体丝状亚种SC型LppQN端基因表达载体,并进行表达产物的纯化及免疫原性检测。方法利用PCR方法在体外定点突变丝状支原体丝状亚种SC型HVRIX株编码色氨酸的基因(TGA突变为TGG),构建表达载体,使其能在大肠杆菌中大量表达,并对表达产物进行纯化和免疫原性检测。结果表达产物约占菌体总蛋白的53.7%,经Westernblot和ELISA检测,表达蛋白具有良好的免疫原性。结论已成功表达了具有免疫原性的LppQ重组表达蛋白,可以作为诊断抗原用于血清学检测。