抗肿瘤药物诱导酵母细胞凋亡及其机制

细胞凋亡是各种抗肿瘤药物引发细胞死亡的主要方式,研究细胞凋亡发生和调节的机制,对改善和提高药物疗效,开发新型抗肿瘤药具有重要的意义。单细胞真核生物酵母能够发生细胞凋亡且凋亡机制从酵母到哺乳动物细胞高度保守,酵母已经成为研究细胞凋亡的重要模式生物。作者主要对以酵母为细胞模型,探讨常见的细胞毒类抗肿瘤药物诱导细胞凋亡过程中出现的典型凋亡特征、起关键作用的基因/蛋白,信号通路以及相关的凋亡表型等机制作一综述。     

宇佐美曲霉羧肽酶成熟肽基因的表达及鉴定

目的克隆、表达宇佐美曲霉(Aspergillus usami)羧肽酶成熟肽基因,并检测其酶学性质。方法根据前期克隆的宇佐美曲霉羧肽酶基因序列设计引物,克隆羧肽酶成熟肽基因AucpA,构建重组表达质粒pPIC9k-AucpA,电击转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导重组蛋白表达。表达的重组蛋白经Sephadex-50层析纯化后,进行酶活性及其影响因素的检测。结果重组表达质粒pPIC9K-AucpA经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约81 000,纯化的重组羧肽酶最高比酶活为57.15 nkat/mg,最适反应温度为45℃,最适反应pH为3.5,金属离子、EDTA对重组羧肽酶的酶活性无影响,而PMSF对重组羧肽酶酶活性的抑制率达50%以上。结论已成功在毕赤酵母中表达了具有较高酶活的宇佐美曲霉羧肽酶,为进一步研究该重组酶的应用奠定了基础。     

羧肽酶研究进展

羧肽酶(Carboxypeptidase)是一类可水解肽链C末端氨基酸残基的蛋白酶,广泛存在于高等植物、动物组织及真菌中,主要分为丝氨酸羧肽酶(EC3.4.16.-)、金属羧肽酶(EC3.4.17.-)和半胱氨酸羧肽酶(EC3.4.18.-)3个亚类。作者综述了羧肽酶的研究进展,主要包括羧肽酶的应用、性质、来源分布、克隆表达及研究意义,并对其研究前景进行了展望。