猪血凝性脑脊髓炎病毒单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)单克隆抗体,并进行鉴定。方法通过差速离心和蔗糖密度梯度离心法对猪HEV进行纯化,免疫BALB/c小鼠后,取其脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞进行融合,经间接ELISA和血凝抑制试验(HI)筛选能稳定分泌抗HEV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对单抗进行生物学鉴定。结果筛选出4株能稳定分泌抗HEV单抗的杂交瘤细胞株2H2、2A1、1E2、4D4。经鉴定,4株杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水抗HEV的ELISA效价可达1∶12800～1∶51200,其中3株HI效价可达1∶24～1∶28,另1株为0。4株杂交瘤细胞分泌的单抗与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)均不发生交叉反应;杂交瘤细胞染色体数为83～103;除2A1单抗为IgG2b外,其他3株均为IgG1;Westernblot分析表明,2H2、2A1和4D4能识别HEV的血凝素-酯酶蛋白(HE),1E2可识别纤突蛋白(S)。结论已成功制备出抗HEV的单克隆抗体,为HEV快速检测试剂的研制奠定了基础。     

猪血凝性脑脊髓炎病毒HE基因的克隆及原核表达

目的构建猪血凝性脑脊髓炎病毒株(67N)血凝素酯酶蛋白(HE蛋白)原核表达系统,为建立特异性免疫学诊断方法提供备选材料。方法克隆猪血凝性脑脊髓炎病毒(67N)HE蛋白抗原表位富集区基因,构建重组表达质粒pET-HE,并在大肠杆菌中诱导表达。经包涵体的初步纯化,金属螯合层析进一步纯化HE蛋白,SDS-PAGE和Western blot进行检测。结果大肠杆菌可高效表达HE蛋白,目的蛋白表达量可占菌体总蛋白的42.2%。纯化后蛋白浓度为0.6 mg/ml,纯度为85.4%。所表达的蛋白可被兔抗猪血凝性脑脊髓炎阳性血清所识别。结论已成功构建猪血凝性脑脊髓炎病毒HE蛋白原核表达载体,重组HE蛋白抗原具有良好的特异性,可作为检测猪血凝性脑脊髓炎病毒血清抗体的候选抗原。