纤维连接蛋白的提取及其在细胞培养中的应用

目的从牛血清中提取纤维连接蛋白(Fibronectin,FN),并观察其在细胞培养中的作用。方法将明胶偶联于溴化氰活化的Sepharose-4B,采用亲和层析法从牛血清或粗提后的样本中提取FN,并检测其蛋白含量。用纯化的牛FN处理细胞培养板,观察细胞在板中的生长情况,并与在进口板中的生长情况进行比较。结果所提取的FN,其蛋白含量约为400μg/ml,电泳结果与FN对照品一致,均为两条主带。用其处理的细胞培养板,培养细胞的形态和密度与进口板比较无明显差异。结论用溴化氰活化的Sepharose-4B提取FN是可行的,且其在细胞培养中有良好的助黏附与贴壁作用,有助于细胞培养。     

抗荧光素单克隆抗体免疫磁珠的制备及初步应用

目的制备抗荧光素单克隆抗体免疫磁珠,并进行初步应用。方法采用B淋巴细胞杂交瘤技术制备抗荧光素单克隆抗体;制备腹水,经50%硫酸铵粗提后,再经阴离子交换树脂DE52进一步纯化单克隆抗体;采用氧化共沉淀法制备纳米磁性粒子;乳液聚合法制备羧基磁性微球;用碳二亚胺将抗荧光素单克隆抗体共价偶联于磁性微球表面,制备抗荧光素单克隆抗体免疫磁珠。用制备的免疫磁珠检测乙肝表面抗原,并与市售ELISA试剂盒的检测结果进行比较。结果共获得5株杂交瘤细胞株,其中1F12细胞株分泌的抗体效价、相对亲和力较高,特异性较好;纯化的1F12株单抗的纯度达95%,蛋白含量为2.4 mg/ml,ELISA效价为106,相对亲和力为0.2 mg/L,与FITC标记的BSA可特异性结合;纳米磁性粒子的平均粒径为150 nm,铁含量为71.63%;羧基磁性微球的平均粒径为210 nm,羧基含量约为2.15 mmol/g;每克羧基磁性微球可结合抗荧光素单克隆抗体约12 mg,制备的免疫磁珠可有效结合荧光素标记的蛋白。应用抗荧光素单克隆抗体免疫磁珠检测乙型肝炎表面抗原的灵敏度高于ELISA试剂,检测限达0.1 ng/ml。结论成功制备了抗荧光素单克隆抗体免疫磁珠,其具有应用于免疫检测分析的价值。