层析介质使用寿命缩小模型的建立和确认

在现代生物制药工艺路线中,层析是最常用的一种技术手段。层析技术所需要的层析介质是药品监管的重点项目之一,其中层析介质的使用寿命(使用次数)必须经研究确认,并经药品监管部门审核和批准。在缩小模型上进行前瞻性研究是被广泛接受的层析介质使用寿命的研究方法。本文就层析介质使用寿命缩小模型的建立和确认作一简要综述。     

蛋白聚合体的快速分析法

蛋白质在发酵和纯化过程中经常会形成聚合体，聚合体在功能上与单体存在差别且容易诱导免疫反应，国家规定生物药品中必须去除。本文主要介绍了使用凝胶过滤层析法检测和分析蛋白聚合体。[编者按]     

蛋白聚合体的快速分析法——Superdex 200 10/300 GL的应用介绍

蛋白质在发酵和纯化过程中经常会形成聚合体．聚合体在功能上与单体存在差别且容易诱导免疫反应。国家规定生物药品中必须去除。本文主要介绍了使用凝胶过滤层析法检测和分析蛋白聚合体。[编者按]     

百日咳毒素、丝状血凝素和黏附素的纯化

目的采用新型层析介质对无细胞百日咳疫苗百日咳毒素(pertussis toxin,PT)、丝状血凝素(filamen-toushemagglutinin,FHA)和黏附素(pertactin,PRN)3组分进行分离纯化。方法调整PT和FHA发酵液上清的pH值和电导后,PT经Capto SP ImpRes和Capto MMC进行两步层析,FHA经Capto SP ImpRes进行一步层析;PRN热处理原液经Capto Adhere和Capto SP ImpRes进行两步层析。纯化产物经4%～12%NuPAGE进行鉴定,ImageQ分析纯度;LC-MASS(Thermo LTQ Velas)进行蛋白质的质谱检测;PT和FHA经BiaCore T200进行定量分析,并计算各步回收率。结果纯化后,无细胞百日咳疫苗3组分纯度均达95%以上;PT和FHA的总回收率均在30%左右;电泳图谱上的各组分条带经LC-MASS鉴定,均与Uniprot Bordetella pertussis数据库数据高度同源。结论采用新型层析介质有效纯化了无细胞百日咳疫苗PT、FHA和PRN,提高了抗原纯度,大大缩短了生产时间。     

应用pQE30系统表达和纯化乙型肝炎病毒核心抗原

目的建立高效、快速、简便的表达和纯化ＨＢｃＡｇ系统,为进一步研究ＨＢｃＡｇ在乙型肝炎发病机理中 的作用及 ＨＢＶ Ｃ基因变异产生 ＨＢｃＡｇ特征。方法应用 ｐＱＥ３０系统在原核细胞表达和纯化 ＨＢｃＡｇ。结果目的蛋 白表达量占细菌总蛋白的２６．２％;５００ｍｌ诱导表达的菌液可得平均５ｍｇ的ＨＢｃＡｇ;纯化的ＨＢｃＡｇ纯度可达到９１.０％; 免疫印迹分析,表达的ＨＢｃＡｇ具有多克隆抗－ＨＢｃ结合活性。结论建立了一套高效、快速表达和纯化ＨＢｃ Ａｇ系统。