几种天然环二核苷酸作为人体佐剂作用潜力的比较

目的对几种天然环二核苷酸(cyclic dinucleotide,CDN)作为人体佐剂作用的潜力进行比较。方法以相同剂量的CDN(c-di-GMP、c-di-AMP、3′3′cGAMP和2′3′cGAMP)同人体来源的单核细胞白血病细胞(human monocytic leukaemia cells,THP-1)共孵育,同时将CDN(c-di-GMP和2′3′cGAMP)与脂质体混合后同THP-1细胞共孵育,刺激5 h后,收集细胞及培养液,采用实时定量PCR及ELISA法检测IFNβ基因及蛋白的表达水平,同时检测脂质体对不同类型CDN刺激作用的影响。结果 4种CDN均能有效刺激THP-1细胞IFNβ基因及蛋白表达水平的提高,且对人体细胞作用从强到弱依次为2′3′cGAMP、3′3′cGAMP、c-di-AMP和c-di-GMP,各自之间差异有统计学意义(P 0. 01)。脂质体能显著增强典型和非典型CDN对THP-1细胞的刺激作用,差异有统计学意义(P 0. 01)。结论 4种天然CDN对人体均具有潜在的佐剂效应,从作用强度看,2′3′cGAMP是最优选择,同时脂质体能增强CDN的这种效应,为将来进一步对CDN类化合物的佐剂作用的研究奠定基础。     

一种体外评价佐剂诱导人急性白血病单核细胞THP-1炎症因子方法的建立

目的 以人急性白血病单核细胞THP-1为模型,建立一种体外评价佐剂诱导人源化细胞炎症因子水平的方法。方法 以细菌内毒素标准品为阳性对照,与佛波酯(phorbol myristate acetate,PMA)共刺激THP-1细胞,检测炎症因子IL-8、干扰素诱导蛋白-10(interferon-induced protein,IP-10)、IL-1β及单核细胞趋化蛋白(monocyte chemotactic protein,MCP-1)的分泌水平,分别对PMA终浓度(25、5、1、0.1 ng/mL)、刺激时间(4、16、24 h)和细胞密度(1×10⁵、5×10⁵、1×10⁶个/mL)进行优化,确定最佳条件。用不同佐剂[(Toll样受体(toll-like receptors,TLR)激动剂类佐剂Pam2CSK4和TLR4以及乳剂类佐剂MF59和AS03]与PMA刺激THP-1细胞,考察不同佐剂刺激产生炎症因子的水平。结果 炎症因子IL-8、IP-10、IL-1β、MCP-1的最佳诱导条件分别为：PMA终浓度0.1、1...     

在小鼠体内评价环化二核苷酸对乙型肝炎病毒表面抗原免疫作用的影响

目的研究环化二核苷酸(cyclic dinucleotide,CDN)在小鼠体内对乙型肝炎病毒表面抗原(HBs Ag)免疫作用的影响,探讨其作为疫苗佐剂的可能性。方法以HBs Ag作为模式抗原,评价3种CDN[环二鸟苷酸(c-di-GMP)、环二腺苷酸(c-di-AMP)和环鸟苷酸-腺苷酸(c GAMP)]在小鼠中对HBs Ag免疫作用的影响。经肌肉注射时以铝佐剂作为对照,经黏膜免疫时以壳聚糖(chitosan,CTS)作为对照,ELISA法测定各组小鼠血清中的乙型肝炎病毒表面抗体(HBs Ab)水平。同时将c-di-GMP与CTS联合进行黏膜免疫,ELISA法测定各组小鼠血清中的HBs Ab水平,ELISPOT法检测小鼠脾细胞特异性细胞因子分泌水平。结果 3种CDN+HBs Ag经肌肉免疫诱导产生的HBs Ab水平均明显高于HBs Ag单独免疫组(P0.001),且3组CDN+HBs Ag组与铝佐剂+HBs Ag组差异无统计学意义(P0.05)。c-di-GMP+HBs Ag经黏膜免疫诱导HBs Ab水平明显高于HBs Ag单独免疫组,且与CTS+HBs Ag组比较,差异无统计学意义(P0.05)。c-di-GMP与CTS联合黏膜免疫诱导的HBs Ab水平与c-di-GMP+HBs Ag组及CTS+HBs Ag组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论 3种CDN均具有一定的免疫增强作用,肌肉注射效果与铝佐剂相当;c-di-GMP黏膜免疫效果与CTS相当,c-di-GMP与CTS联合黏膜免疫未显示有协同免疫增强作用。提示CDN具有进一步开发成疫苗佐剂的潜力。