细胞因子疫苗的研究进展

细胞因子是由免疫细胞(单核巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞及NK细胞)及相关细胞(如血管内皮细胞、纤维母细胞等)产生的一类可调节细胞功能的高活性、多功能的多肽分子。在病理状态下,细胞因子在介导和调节自身免疫性疾病、慢性炎症、肿瘤及HIV感染中具有重要作用。细胞因子具有双重效应,既可抵御和治疗某些疾病,也可能导致和促进某些疾病的发生。细胞因子调节疗法有补充/添加疗法和阻断/拮抗疗法两类。早期细胞因子阻断/拮抗疗法是被动免疫抗细胞因子抗体,但此种疗法存在明显的缺陷和不足。主动免疫疫苗可激发体内产生自身细胞因子抗体,阻断细胞因子活性,是近年来细胞因子调节疗法的主要进展之一,本文对此领域的研究进展作一综述。     

人用精制Vero细胞狂犬病疫苗的研制

目的　应用Ｖｅｒｏ细胞研制人用精制狂犬病疫苗。方法应用Ｖｅｒｏ细胞经转瓶或生物反应器培养制备人用精制江大病疫苗。结果各项质控指标均符合ＷＨＯ和中国生物制品规程标准,经Ｉ期临床观察疫苗是安全的。结论用Ｖｅｒｏ细胞生产的狂犬病疫苗产量大,效价高,不良反应少,且能进行工业化生产。     

人用冻干无佐剂狂犬病疫苗的临床观察

目的观察人用冻干无佐剂狂犬病疫苗(武生欣宁)接种人体后的临床反应和免疫效果。方法40名健康者分别于0、3、7、14和28d接种疫苗,观察接种者副反应,并于接种后采血,用快速荧光灶抑制试验检测血清中和抗体水平。结果第1针和第2针接种后副反应率分别为2.5%和7.9%,后3针副反应率为0。免疫前抗体均为阴性,接种后第7天抗体阳转率为76%,第14天抗体水平GMT为9.42IU/ml,阳转率100%,第28天抗体水平GMT为9.83IU/ml,阳转率100%。结论人用冻干无佐剂狂犬病疫苗反应轻微,效果良好。     

人源抗乙型肝炎病毒表面抗原基因工程IgG全抗体的表达、纯化及初步鉴定

目的对人源抗乙型肝炎病毒表面抗原的基因工程IgG全抗体进行表达、纯化及初步鉴定。方法用含Fc片段抗-HBsAg Fab抗体基因的载体pAC-HBs-Fc,与杆状病毒线性DNA共转染昆虫细胞sf9,产生重组抗-HBsAg的全抗体。以不同浓度的HBsAg包被酶标板孔,用间接ELISA法检测培养上清中抗体的表达及特异性;用蛋白G亲和层析柱进行抗体的纯化,并对纯化的抗体进行SDS-PAGE、Western blot和竞争性ELISA分析。结果上清中表达的重组IgG抗体仅与HBsAg呈阳性反应,特异性良好,纯化后其纯度达97.1%。经SDS-PAGE和Western blot分析可见,IgG抗体轻链和重链的相对分子质量分别约为27000和55000,为人源IgG抗体。CHO表达的HBsAg和血源性HBsAg能竞争性抑制该重组IgG抗体与E.coli表达的HBsAg反应,其抑制率分别为55.9%和81.9%。结论人源抗乙型肝炎病毒表面抗原的基因工程IgG全抗体可在杆状病毒载体表达系统中成功表达。     

丙型肝炎病毒基因组及其蛋白结构和功能的研究进展

<正> 自从1989年,美国Chiron公司的Choo等人首次从HCV慢性感染的黑猩猩血浆中克隆HCV基因组以来,在短短的四年时间内,无论是在HCV基因组的结构和功能的研究上,还是在其编码多聚蛋白的结构和功能的研究上都取得了迅猛的进展。本文综述这两方面进展情况。 HCV基因组的结构和功能到目前为止,全世界分离的HCV,共80余株,其中已弄清了8株.HCV基因组完整核苷酸序列:美国株HCV-l和HCV-H;日本株HCV-J、HCV-BK、HC-J4、HC-J6和HC-J8;中国台湾株HCV-T。同时也分析了某些HCV的基因组部分核苷酸序列:美国株HCT8、23、27、Tb、ECl、10、US3、6、11;日本株     

应采用细胞培养法取代动物试验法检定狂犬病疫苗

<正> 在《中国生物制品规程》2000年版中,规定的狂犬病疫苗的多项检定均采用小鼠实验,如病毒滴定、病毒灭活确证试验以及疫苗效力测定等。     

丙型肝炎病毒C区和NS3区嵌合基因的克隆及表达

目的获得丙型肝炎病毒(HCV)C-NS3嵌合抗原,以提高HCV酶联免疫吸附试验诊断试剂的质量。方法应用SOE-PCR(拼接重叠延伸PCR)的方法,构建了HCV的C区和NS3区的嵌合基因,克隆于表达载体pGEX-4T3,并转化于大肠杆菌BL21,经筛选,IPTG诱导HCV的C-NS3嵌合抗原的表达。经SDS-PAGE检测表达水平,Western blot检测抗原特异性。结果SOE-PCR构建的HCV C区和NS3区嵌合基因在BL21中获得表达。经鉴定,其相对分子质量约为75000,并具有高度特异性。结论已获得HCV C-NS3嵌合抗原,为提高HCV酶联免疫吸附试验诊断试剂的质量奠定了基础。     

抗乙型肝炎病毒表面抗原的IgG全抗体表达载体的构建

目的构建抗乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的IgG全抗体杆状病毒表达载体。方法用PCR方法扩增抗HBsAg抗体Fab片段的轻链(L)及重链Fd段(VH+CH1)基因片段,将杆状病毒载体pAC-k-Fc与L基因连接,重组为过渡表达载体pAC-k-L-Fc,再与Fd基因连接,构建重组表达载体pAC-HBs-Fc,并进行酶切鉴定及DNA测序分析。确定正确后,转染昆虫细胞sf9,用免疫荧光检测IgG的表达。结果PCR扩增的片段约650bp,与预期值一致。载体pAC-k-L-Fc和pAC-HBs-Fc的酶切片段和DNA序列与预期结果一致。转染sf9细胞呈阳性荧光反应,未转染细胞呈阴性荧光反应。结论已成功构建表达载体pAC-HBs-Fc,为表达抗人HBsAg的IgG全抗体奠定了基础。