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蛋白变性剂对多聚半乳糖醛酸酶及其化学修饰酶催化活性的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
为了探索几种蛋白质变性剂对多聚半乳糖醛酸酶的作用效果,以水溶性低分子量壳寡糖(COS,分子量约5000)作为修饰剂对已纯化的多聚半乳糖醛酸酶(PG)进行化学修饰,得到纯化的化学修饰酶(COS-PG),然后,测定不同蛋白变性剂(尿素、盐酸胍、SDS和苯酚)对纯化的PG和COS-PG催化活性的影响。结果表明,修饰后COS-PG的比活性是340.10 U(mg protein)1,比修饰前的PG提高了153%,COS-PG的糖含量比PG提高了43.11%,COS-PG的氨基修饰率为32.85%。SDS(十二烷基硫酸钠)、苯酚对PG和COS-PG活性有抑制作用,1 mmol L 1的SDS分别抑制了PG和COS-PG活性的80.99%和91.14%。10 mmol L 1的苯酚分别抑制了PG和COS-PG活性的34.08%和32.70%。低浓度的尿素和盐酸胍对PG有激活作用,5 mmol L 1的尿素使PG活性提高157.79%,3 mmol L 1的尿素使COS-PG的活性提高67.32%。2 mmol L 1的盐酸胍使PG活性提高57.64%,1 mmol L 1的盐酸胍使COS-PG的活性提高5.76%。 相似文献
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异丙醇对猪胰脂肪酶催化动力学和分子光谱的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
为了研究异丙醇对猪胰脂肪酶催化橄榄油水解反应的作用机理,在体系中加入不同体积分数的异丙醇,测定了脂肪酶的活性、动力学和光谱变化.活性测定结果表明,低体积分数的异丙醇对该酶有一定的激活作用,体积分数为20%的异丙醇使酶活性提高了229%.光谱分析结果显示,经异丙醇处理后猪胰脂肪酶的紫外吸收光谱和荧光发射光谱发生了变化,紫外差示光谱则出现了明显的负峰.动力学研究结果表明,异丙醇处理后,猪胰脂肪酶的vmax基本不变,而Km值则明显减小. 相似文献
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为了解蛋白质变性剂对酵母蔗糖酶(YInv)及其修饰酶(COS-Inv)的作用效果及分子机理,用尿素和盐酸胍处理天然蔗糖酶及其修饰酶,对处理前后酶活性的变化、酶的催化动力学、吸收光谱、紫外差示光谱和荧光光谱进行了探索。研究结果发现,低浓度(< 0.3 mol·L-1)尿素对COS-Inv有激活作用,0.2 mol·L-1的尿素溶液使其活性提高了10.54%;但尿素对YInv只表现出抑制作用。盐酸胍对YInv和COS-Inv的活性都产生明显的抑制作用。动力学分析结果显示,0.2 mol·L-1的尿素可提高COS-Inv与底物的亲和力,而降低YInv与底物的亲和力。盐酸胍对YInv的抑制主要是通过降低最大反应速度来实现的,其反应机理类似于反竞争性抑制。盐酸胍对COS-Inv的抑制是通过降低酶与底物的亲和力来实现的,类似于竞争性抑制。紫外吸收光谱、紫外差示光谱和荧光光谱分析显示,在盐酸胍和尿素溶液中,YInv和COS-Inv的分子构型基本不变,但其构象却发生明显变化。 相似文献