樟芝多糖通过降低NLRP3 Caspase1炎性小体表达改善帕金森小鼠神经行为学的机制研究

目的:研究樟芝多糖通过降低NLRP3-Caspase1炎性小体表达改善6-OHDA构建的帕金森小鼠模型的行为学机制。方法:利用6-OHDA脑内注射构建帕金森小鼠模型，通过酪氨酸羟化酶（TH）免疫组化染色和行为学判定小鼠模型的构建成功。利用樟芝多糖进行干预，分别在干预前、干预后的第1、3、7天4个时间点进行神经行为学实验，分别采用转棒实验、爬杆实验检测小鼠自主行为能力以及协调能力，4个时间点取小鼠尾静脉外周血采用ELISA法检测外周血中Caspase1和IL-1β的表达，樟芝多糖干预第7天时待进行完行为学实验后小鼠断颈处死，取小鼠脑组织-纹状体，Western blot法检测纹状体中Caspase1、proCaspase1、NLRP3的表达，高效液相色谱检测纹状体中单胺类神经递质的表达，RT-QPCR检测Caspase1、NLRP3、IL-1β、IL-4、IL-6的mRNA表达。NISSl染色检测小鼠脑组织神经细胞凋亡情况。 结果:6-OHDA脑内注射可以造成小鼠帕金森样病变，且TH蛋白表达显著下调，樟芝多糖干预后小鼠的行为学得到显著改善（P<0.05），纹状体中Caspase1、proCaspase1、NLRP3的表达显著下调，与模型小鼠相比具有统计学差异（P<0.05），且相关炎症因子Caspase1、NLRP3、IL-1β、IL-4、IL-6的mRNA表达下调（P<0.05），纹状体中单胺类神经递质表达上升（P<0.05）。结论:樟芝多糖可以通过下调NLRP3-Caspase1炎性小体表达来改善6-OHDA构建的帕金森小鼠模型行为改善，这可能是樟芝多糖治疗帕金森的机制之一。     

丁苯酞通过激动cAMP/CREB/BDNF信号通路改善小鼠缺血再灌注后认知障碍的作用机制

目的: 研究丁苯酞通过激动cAMP/CREB/BDNF信号通路改善小鼠缺血再灌注后认知障碍的作用机制。方法: 采用反复结扎双侧颈总动脉造成缺血再灌注损伤小鼠的认知障碍模型（VCI）。将小鼠分为假手术组、模型组、药物组，药物组分别采用5、10、20 mg/kg的丁苯酞（NBP）干预。Morris水迷宫实验检测小鼠认知能力，尼氏（Nissl）染色观察小鼠海马神经元的形态，比色法检测海马中超氧化物歧化酶（SOD）的活性、丙二醛（MDA）的水平以及一氧化氮（NO）的水平。Western blot法检测海马组织中环磷酸腺苷（cAMP）、磷酸化环磷酸腺苷反应原件结合蛋白（p-CREB）、脑源性神经营养因子（BDNF）的表达水平。结果: 模型组小鼠认知功能下降，与假手术组比较差异具有统计学意义（P<0.05）；模型组小鼠海马区组织中SOD活力下调，MDA和NO含量上调，与假手术组比较差异具有统计学意义（P<0.05）。Nissl染色显示模型组小鼠神经元细胞变性坏死且cAMP、CREB、BDNF蛋白表达受到抑制，与假手术组比较差异具有统计学意义（P<0.05）。NBP干预后，小鼠认知能力显著提高，与模型组比较差异具有统计学意义（P<0.05）。海马区SOD活性上调，MDA和NO水平下调，具有剂量依赖性，与模型组比较差异具有统计学意义（P<0.05）。cAMP、p-CREB、BDNF蛋白表达上调；Nissl染色显示，NBP干预后海马区神经元细胞凋亡减少。结论: NBP改善卒中后认知障碍的机制可能与激活cAMP/CREB/BDNF信号通路有关。     

α-突触核蛋白激活NLRP3炎性小体介导神经细胞焦亡的发生

目的:研究α-突触核蛋白（α-synuclein）对于神经细胞焦亡发生的影响和机制。方法:以小鼠海马神经元细胞HT22细胞株为对象,体外培养后用α-synuclein干预细胞,以CCK-8法检测细胞活力,确定IC50值。设置对照组（Con组）后,采用TUNEL染色法检测细胞焦亡水平,免疫荧光法观察Gasdermin-D-N（GSDMD-N）的表达,Western blot法检测细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）、细胞凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、Gasdermin-D（GSDMD）、GSDMD-N、Caspase-1的表达水平,酶联免疫吸附法检测培养基中IL-18、IL-1β的表达水平。采用Caspase-1抑制剂预处理HT22后,同样使用IC50值的α-synuclein干预细胞,同时设置α-synuclein组（单纯α-synuclein干预）和α-synuclein+ML132组,检测细胞焦亡的水平。结果:α-synuclein的IC50值为50 nmol/L。α-synuclein干预后细胞焦亡数目显著增高,TUNEL染色显示阳性细胞数目多于Con组,免疫荧光染色结果显示细胞中GSDMD-N的表达水平上调,细胞中NLRP3、ASC、GSDMD-N、Caspase-1的表达水平显著高于Con组,而GSDMD水平下调,同时细胞培养基中IL-18、IL-1β的水平上调。Caspase-1抑制剂处理后,50 nmol/L的α-synuclein干预后,细胞焦亡水平显著低于α-synuclein组,同时免疫荧光染色结果显示GSDMD-N的水平下调,细胞中NLRP3、ASC、GSDMD-N、Caspase-1的表达水平显著低于α-synuclein组,而GSDMD水平上调,培养基中IL-18和IL-1β的水平下调。结论:α-synuclein可以通过激活NLRP3炎性小体活化继发神经细胞焦亡的发生,在帕金森病的发生发展中具有一定的作用。     

依折麦布与考来替泊交替给药对于高脂血症大鼠脂代谢的调节作用

目的: 探讨依折麦布和考来替泊交替给药对于高脂血症大鼠的脂代谢调节作用。方法: 选用清洁级的SD大鼠50只,雌雄各半,通过高脂饲料饲养造模,造模成功后随机分组,设置正常组、模型组、实验组（依折麦布组、考来替泊组、依折麦布+考来替泊组）,实验组每日灌胃给药,正常组和模型组给予生理盐水,连续给药8周,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量以及乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、脂肪酸合酶(FAS)、3-羟基-3-甲基戊酰辅酶A还原酶( HMGR)、肝脏肉毒碱棕榈酰转移酶 I(CPT-I)的mRNA的表达。结果: 实验组大鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C含量以及ACC、FAS、HMGR、CPT-I的mRNA表达相比模型组均有降低且交替用药组较单一用药组含量显著降低（P<0.05）。结论: 依折麦布和考来替泊交替给药对于高脂血症大鼠脂代谢的调节优于单一用药,但是对人体的作用还需要临床验证。     

丁苯酞通过内质网应激途径抑制氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞凋亡的影响

目的:探究丁苯酞（N-butylphthalide,NBP）通过内质网应激途径对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导内皮细胞凋亡的影响。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）,给予NBP(5、10、20 mg/L)、4-苯丁酸（4-phenylbuturicacid,PBA,4 mmol/L）预处理1 h,再加入ox-LDL（100 mg/L）培养。CCK-8法检测细胞活力的变化,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测培养基中乳酸脱氢酶（latic dehydrogenase,LDH）的水平,Hoechst 33342染色观察细胞凋亡的水平,Western blot法和RT-qPCR法检测内质网应激信号关键蛋白CHOP、GRP78的表达水平。结果:ox-LDL可以诱导HUVECs中内质网应激途径激活,从而促进细胞的凋亡;NBP呈剂量依赖性地抑制ox-LDL诱导的HUVECs损伤,细胞活力提高,凋亡率下调,同时LDH的水平降低;研究发现,NBP与PBA类似,可以抑制CHOP、GRP78的表达,抑制内质网应激的激活。结论:丁苯酞可以抵抗ox-LDL诱导的HUVECs凋亡,其机制与抑制内质网应激途径有关。     

樟芝分级沉淀的多糖组分对链脲佐菌素构建的糖尿病小鼠的降糖作用及体外抑制α-糖苷酶活性的研究

目的: 探索乙醇分级沉淀得到的三种多糖组分对于链脲佐菌素（STZ）构建的糖尿病小鼠的降血糖作用及体外α-糖苷酶的活性抑制作用。方法: 利用乙醇对总多糖进行分级沉淀，得到三种多糖。将小鼠进行STZ腹腔注射造膜，构建糖尿病小鼠，将小鼠分为对照组、模型组、药物组（分为三组，为三种多糖），通过药物干预14 d后，检测小鼠空腹血糖（FBG）、胰岛素（FINS）、胰高血糖素（GC）的表达，计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR），取小鼠胰岛组织检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的表达。体外进行α-糖苷酶的活性抑制的检测。结果: 三种多糖均有不同程度的降糖作用，其作用与胰岛素、胰高血糖素的表达有关，多糖对于胰岛组织中SOD、MDA、GSH-Px的表达也有不同程度的干预作用。体外研究表明，多糖对于α-糖苷酶有着显著的抑制作用，且有剂量依赖性。结论: 樟芝多糖对于糖尿病小鼠有着显著的治疗作用，而不同组分的多糖效果不一，作用机制多样。樟芝多糖是一种具有潜力的多糖类药物，值得深入研究和开发。     

沉默YAP基因提高伊马替尼耐药的人髓性白血病细胞K562药物敏感性的研究

目的: 探究沉默YAP基因后,提高伊马替尼耐药的K562细胞（K562/IMA）对于伊马替尼敏感性的作用及相关机制,为伊马替尼耐药的人髓性白血病治疗提供参考。方法: 采用小干扰RNA技术（siRNA）转染YAP的siRNA-YAP沉默K562/IMA的YAP基因。设置对照组（Control）、siRNA阴性对照组（siRNA-NC）和YAP siRNA组（siRNA-YAP）。采用RT-qPCR和Western blot法鉴定沉默后各组细胞YAP蛋白和mRNA的表达水平。CCK-8法检测各组细胞对于伊马替尼的敏感性,并计算半数抑制浓度IC50。流式细胞术检测各组细胞的凋亡率。Western blot法检测YAP、Bcl-2、Bax、cleaved-caspase-3、caspase-3、细胞色素C（Cyto-C）的表达水平,Transwell小室检测细胞转移侵袭能力。结果: YAP基因沉默后,siRNA-YAP组细胞中YAP的蛋白和mRNA表达水平显著低于Control组和siRNA-NC组,沉默效果较好。siRNA-YAP的IC50值显著低于Control组和siRNA-NC组,具有统计学意义（P<0.05）,而流式细胞术结果显示,siRNA-YAP组细胞在相同药物剂量下,凋亡率显著高于Control组和siRNA-NC组,具有统计学意义（P<0.05）。YAP沉默的K562/IMA细胞迁移侵袭能力显著下降。伊马替尼干预后,siRNA-YAP细胞中Bcl-2/Bax的水平下调,cleaved-caspase-3、caspase-3和Cyto-C的水平上调,相比Control组和siRNA-NC组,具有统计学意义（P<0.05）。结论: 沉默伊马替尼耐药的K562/IMA细胞中YAP基因,可以恢复肿瘤细胞对于伊马替尼的敏感性,可以促进线粒体凋亡途径的激活,导致耐药肿瘤细胞的凋亡。     

丁苯酞对于糖氧剥夺条件下人脑微血管内皮细胞能量代谢的影响及保护作用

目的: 研究糖氧剥夺（OGD）条件下丁苯酞（NBP）对于人脑微血管内皮细胞（HBMEC）能量代谢的影响及保护作用。方法: 采用糖氧剥夺（OGD）方法处理HBMEC细胞,将细胞分为对照组、模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。其中对照组为正常培养的HBMEC细胞、模型组为OGD处理的细胞、低剂量组为OGD+5 μmol/L的NBP、中剂量组为OGD+10 μmol/L的NBP、高剂量组为OGD+20 μmol/L的NBP。采用CCK-8试剂盒检测细胞活力;试剂盒检测乳酸脱氢酶（LDH）漏出率、钠-钾-三磷酸腺苷酶（Na ⁺ -K ⁺ -ATPase）和钙-三磷酸腺苷酶（Ca ²⁺ -ATPase）活性、细胞内钙离子的浓度;流式细胞术检测细胞凋亡率;Hoechst33342法进行活细胞染色;高效液相色谱法检测细胞中磷酸腺苷（AMP）、二磷酸腺苷（ADP）、 三磷酸腺苷（ATP）的含量,能荷EC值。结果: 模型组中细胞活力、Na ⁺ -K ⁺ -ATPase、Ca ²⁺ -ATPase的活性降低,而细胞内钙离子浓度、细胞凋亡率、乳酸脱氢酶（LDH）漏出率明显提高,能量代谢中模型组ATP、ADP的含量降低,AMP含量增高,EC值明显降低。NBP干预后可以提高细胞活力,提高Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase酶活性,降低细胞中钙离子浓度和细胞凋亡率,且还可以提高细胞中ATP、ADP的含量,降低AMP的含量,提高EC值,具有剂量依赖性。结论: NBP可以保护HBMEC在OGD条件下的损伤,其作用机制和改善细胞能量代谢、抑制细胞内超钙有关。     

热休克转录因子2通过HMGB1-TLR4-NF-κB信号促进克罗恩病炎症反应的作用机制研究

目的:研究热休克转录因子2（HSF2）通过HMGB1-TLR4-NF-κB信号促进小鼠克罗恩病炎症反应的作用机制。方法:2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）构建小鼠克罗恩病模型,将小鼠分为正常组,模型组,对照组,实验组。对照组采用高迁移率族蛋白1（HMGB1）抗体处理阻断HMGB1信号,对照组和实验组均采用重组HSF2干预。观察小鼠一般生活状况（包括：生存状态、体质量状态、大便性状、进食饮水状态、毛发光泽度、精神状态和活动状态）,小鼠疾病活动指数（DAI）评估小鼠疾病情况,苏木精-伊红（HE）染色检测小鼠肠组织病理改变,免疫组织化学染色（IHC）检测小鼠肠组织中p-65的表达,酶联免疫吸附法（ELISA）检测小鼠结肠组织中炎症因子白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）的水平,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠组织中HMGB1、Toll样受体4（TLR4）、NF-κB（p-P65)、髓样分化因子（MyD88）的表达水平。结果:TNBS成功诱导小鼠克罗恩病,实验组小鼠一般生活状态较差,且DAI评分显著高于对照组、模型组,具有统计学意义（P<0.05）。HE染色显示实验组小鼠结肠黏膜糜烂、水肿、炎症反应程度高于模型组和对照组。实验组小鼠结肠组织中炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6的水平显著高于模型组和对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。实验组组织中HMGB1、TLR4、NF-κB（p-P65)、MyD88的表达水平显著高于模型组和对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:HSF2可以通过激活HMGB1-TLR4-NF-κB信号促进小鼠克罗恩病炎症反应。