内皮素受体拮抗剂CPU-0213 血药浓度的HPLC 测定法和药动学研究

目的: 建立内皮素受体拮抗剂CPU-0213 在小鼠和大鼠血清中的检测方法, 测定单次静脉注射(iv) CPU-0213 80 mg·kg^-1后在小鼠和大鼠体内的药代动力学。方法: 用HPLC 测定小鼠和大鼠血清中的药物浓度, 3P97 程序拟合药动学参数。结果: CPU-0213 在0.4～200 μg·L^-1的范围内呈良好的线性关系(r=0.9998), 最低检测浓度为35 μg·L^-1。日内差小于2.7 %, 日间差小于6.3 %, 方法回收率大于95.9 %。CPU-0213 在小鼠和大鼠体内的药-时数据均符合二室模型, 消除半衰期分别为83.0±1.8 min 和96.6±11.5 min 。结论: 该方法灵敏、简单, 专属性强, 重现性好。单次iv CPU-021380 mg·kg^-1后, 在小鼠和大鼠体内的药代动力学未见种属差异性。     

环孢素A 改善异丙肾上腺素所致心肌损害和纤维化可能由抑制内皮素通路所介导

目的:研究环孢素A(Cyclosporine A, CsA)对异丙肾上腺素(isoproterenol, Iso) 诱导心肌损害和纤维化的改善, 探讨内皮素通路在其过程中的作用。方法:SD 大鼠给予Iso(2 mg°kg^-1°d^-1, s.c.) 10 d, 建立大鼠心肌损害和纤维化病变。CsA治疗组预先给予CsA (25 mg/kg, s.c.) 一次。结果:Iso 损害心肌, 引起心功能下降, 使左室心肌中羟脯氨酸(hydroxyproline, Hyp) 含量增高, 内皮素-1(ET-1) 及受体(ETA R)、结缔组织生长因子(CTGF)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9) mRNA 和蛋白表达上调。CsA 明显改善心功能, 降低Hyp 含量, 减轻升高的mRNA 和蛋白表达。结论:CsA 改善Iso引起的大鼠心功能损害和纤维化, 与抑制内皮素通路相关。     

内皮素受体拮抗剂CPU0213对异丙肾上腺素心肌病SERCA2a表达的改善作用

目的 研究异丙肾上腺素心肌病模型心肌细胞肌浆网钙ATP 酶(sarco-endoplasmic reticulumATPase 2a, SERCA2a) 表达的改变, 以及新型内皮素受体拮抗剂CPU0213的治疗作用。方法 雄性SD大鼠皮下给予异丙肾上腺素(2 mg·kg^-1·d^-1)10 d, 治疗组动物在第6 到第10 天皮下给予CPU0213 (30 mg·kg^-1·d^-1)。各组动物颈动脉插管记录心功能指标:左心室收缩压(LVSP), 左心室舒张末期压(LVEDP), 和左心室压力变化最大速率(±dp dtmax)。左心室心肌组织SERCA2a 的mRNA 及蛋白表达分别用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) 和蛋白免疫印迹法(Western blotting) 测定。结果 异丙肾上腺素引起左心室收缩和舒张功能明显下降, 同时SERCA2a 的mRNA 及蛋白表达均显著下调(P<0.05)。CPU0213 显著提高SERCA2a 表达(P<0.05), 明显改善心功能(P<0.05)。结论 CPU0213 可通过逆转肌浆网钙调控蛋白SERCA2a 的表达下调, 使异丙肾上腺素引起的心功能下降得以恢复。本实验证明SERCA2a是β 受体过度激活引发心衰过程中的重要靶点。内皮素受体介导了β 受体过度激活状态下SERCA2a的表达下调, 是内皮素受体拮抗剂治疗心衰的重要依据之一。     

内皮素受体阻断剂 CPU0213 改善糖尿病大鼠心肌病由抑制NADPH氧化酶所介导

目的: 研究糖尿病大鼠心肌病中由激活的NADPH氧化酶导致的损害,可由内皮素受体拮抗剂CPU0213逆转。方法: SD大鼠一次i.p.链脲佐菌素60 mg/kg造成大鼠糖尿病模型,治疗组在后4周给予CPU0213(100 mg/kg, p.o .)和氨基胍(100 mg/kg, p.o.)治疗,连续4周。结果: CPU0213与氨基胍降低血糖效应不明显,但可改善心肌肥厚、降低心肌内皮素-1(ET-1) 和氧化应激水平。CPU0213和氨基胍明显抑制高糖温孵的心肌细胞NADPH氧化酶p22phox和p67phox亚基的mRNA和蛋白过表达。结论: 内皮素受体拮抗剂CPU0213和氨基胍改善糖尿病大鼠心肌病,由抑制心肌中NADPH氧化酶过表达所介导。     

氯苄四氢小檗碱对抗H2O2引起无血清培养的血管内皮细胞凋亡及坏死

目的: 研究氯苄四氢小檗碱对过氧化氢(H₂O₂)引起无血清培养的小牛主动脉血管内皮细胞的凋亡、增殖、坏死的影响。方法: 通过体外细胞培养, 以噻唑兰(MTT) 法测定细胞存活率;用流式细胞术检测细胞DNA 含量及凋亡细胞百分率、增殖率;DNA 琼脂糖凝胶电泳法观察细胞凋亡过程中DNA 断裂程度。结果: H₂O₂ 诱导无血清培养的内皮细胞凋亡, 氯苄四氢小檗碱可显著降低内皮肌细胞中凋亡细胞百分率, 并抑制其增殖, 也减少凋亡细胞DNA 断裂, 同时也减少其引起的平滑肌细胞坏死。结论: 氯苄四氢小檗碱可对抗H₂O₂ 引起的无血清培养的血管平滑肌细胞凋亡、增殖及坏死。     

多非替利衍生物CPU228(V03) 对大鼠心室肌细胞钙瞬变的调节

目的:在β-受体激动情况下, 研究多非替利衍生物CPU 228 对电刺激触发心肌细胞的胞浆Ca²⁺浓度([Ca²⁺]_i) 变化及钙瞬变动力学参数的影响。方法:游离单个大鼠心室肌细胞, Fluo-3/AM 负载, 电刺激诱发心室肌细胞钙瞬变, 定量测定心室肌细胞内Ca²⁺浓度变化, 异丙肾上腺素(isoproterenol, ISO) 100 nmol°L^-1激动β-受体, 观察CPU 228 1 μmol°L^-1对钙瞬变动力学参数、[Ca²⁺]_i 及钙负荷水平的影响。结果:CPU228 1 μmol°L^-1对大鼠心室肌细胞[Ca²⁺]_i 的影响不明显(P>0.05);ISO 100 nmol°L^-1显著升高大鼠心室肌细胞[Ca²⁺]_i 和细胞内钙负荷水平, 缩短钙瞬变时程, 并且增加钙瞬变的消除速率。CPU 2281 μmol°L^-1显著抑制ISO 的上述作用。结论:在β-受体激动情况下, CPU 228 可以降低心肌细胞[Ca²⁺]_i,使ISO 改变的钙瞬变动力学参数恢复到正常水平。     

果糖二磷酸锶改善糖尿病大鼠睾丸病变及对前原内皮素和内皮素转变酶表达的影响

目的 研究果糖二磷酸锶(FDP-Sr) 对糖尿病睾丸病变的改善, 与丙酸睾酮对比, 并初步探讨其可能机制。方法 链脲佐菌素致糖尿病雄性大鼠8 周, 在后4 周, 分别每日灌胃FDP-Sr(50, 100,200 mg/kg) 以及丙酸睾酮(4 mg/kg, s.c.治疗),测血中睾酮、谷胱甘肽过氧物酶(GSHpx) 、睾丸中内皮素-1(ET-1) 系统中前原ET-1(前原内皮素,ppET-1) 和ET 转变酶(ECE) 的mRNA 表达, 观察睾丸组织学改变。结果 糖尿病大鼠睾丸曲细精管萎缩明显, 血中睾酮、GSHpx 明显降低, ppET-1和ECE 呈高表达。上述改变被FDP-Sr 明显改善,丙酸睾酮作用不明显。结论 FDP-Sr 治疗糖尿病睾丸病变优于丙酸睾酮, 可能与抑制睾丸中内皮素系统的高表达相关。