环介导等温扩增法快速检测阪崎肠杆菌

目的：研究阪崎肠杆菌的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,简称LAMP)方法,实现对食品中阪崎肠杆菌的快速检测。方法：针对阪崎肠杆菌16S rRNA 基因(16S rDNA)及外膜蛋白A(OmpA)基因设计LAMP 引物,扩增后通过电泳或加入显色剂SYBR-GREEN Ⅰ检测。结果：LAMP 法能有效特异地检测出阪崎肠杆菌;以16S rRNA 引物检测阪崎肠杆菌的最低检出限为32CFU/mL,用OmpA 引物检测阪崎肠杆菌的最低检出限达3CFU/mL,扩增产物加入SYBR-GREEN Ⅰ在紫外条件下可见荧光,与电泳检测具有同样的灵敏度。结论：LAMP 法可实现对阪崎肠杆菌的快速检测,在食品检测中具有广阔的应用前景。     

16MnCr5钢大马力柴油机凸轮轴渗碳淬火组织演变

通过光学显微镜、扫描电镜、XRD测试、硬度梯度测试等研究16MnCr5低碳合金钢凸轮轴渗碳淬火+低温回火后沿径向的显微组织和硬度。结果表明,940 ℃强渗适用于16MnCr5钢凸轮轴,显微组织沿凸轮轴径向变化明显,渗碳层表面组织为高碳的针状马氏体和10%左右的残留奥氏体,表层硬度可达750 HV,有效硬化层深度可达1.5 mm以上,基体组织为贝氏体和低碳马氏体的混合组织。     

雀稗麦角菌原生质体诱变育种及发酵条件研究

为获得麦角碱高产菌株,提高雀稗麦角菌（Claviceps paspali strain 3103）发酵的产碱率,用溶壁酶水解处理菌丝体、不同浓度的亚硝基胍诱变处理制备的原生质体,经再生培养获得诱变菌株,再经紫外初筛后进行发酵复筛,采用Van—Urk方法测定产碱量。筛选得到的高产菌株进行二级发酵并优化其发酵条件。实验结果表明,经亚硝基胍诱变处理,麦角总碱的产率由90mg／L提高到了1600mg／L,增加了约16倍;单位产碱率由22．5mg／L／g提高到了400mg／L／g,增加了约17倍;连续传代培养可以得到稳定的高产菌株,接种量为20％时可有效缩短发酵周期。结果表明,用亚硝基胍对原生质体进行诱变处理可有效提高C．papspali的产碱率。     

噬菌体基因Ⅴ蛋白基因的合成、重组表达及功能分析

目的:研究丝状噬菌体基因V蛋白(gene V protein,GVP)基因的合成、重组表达及其功能。方法:根据GVP的基因序列,选择大肠杆菌偏爱的密码子,设计合成了8个寡核苷酸片段,利用重叠延伸PCR合成GVP基因序列,将其与原核表达载体pET-28a-c(+)质粒重组,转化大肠杆菌,获得GVP蛋白阳性表达菌株,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,产物经Ni+-NTA琼脂糖凝胶层析纯化,获得目的蛋白GVP,DNA结合实验检测其功能。结果:成功合成出GVP基因,重组体在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导获得高效表达,DNA结合实验表明GVP与单链DNA间解离平衡常数Kd=7.27×10-5mol/L。结论:重组构建并高效表达的GVP蛋白具有较高单链DNA结合能力,可用于食品病原微生物特定单链DNA分子的浓缩和分离。