丹参注射液对小鼠心肌干细胞的影响

目的:探讨丹参注射液对小鼠原位心脏成体干细胞数量和旁分泌功能的影响。方法:以不同剂量丹参注射液对小鼠进行灌胃给药,分为高剂量丹参注射液组(5 g·kg^-1·d^-1)和低剂量丹参注射液组(0.5 g·kg^-1·d^-1),对照组采用相同体积生理盐水,每天1次连续1周。1周后经小鼠眼眶取血,检测血常规及肝肾功能;以小鼠新鲜心脏组织冰冻切片行免疫荧光染色,检测Sca-1⁺成体干细胞数量;以Real-Time PCR检测心脏血管内皮生长因子(VEGF)、IL-6、BAD基因表达情况。结果:灌胃1周后,三组间血常规、肝肾功能差异无统计学意义(P>0.05);与高剂量丹参注射液组比较,低剂量丹参注射液及对照组中Sca-1⁺成体干细胞数量及VEGF和IL-6基因表达显著减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。同时,丹参注射液高剂量组BAD基因表达较丹参注射液低剂量组和对照组显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:丹参注射液能增多小鼠心脏中成体心脏干细胞数量,改善旁分泌功能。     

5-氮胞苷诱导心肌组织中c-kit+干细胞分化的实验研究

目的:创建小鼠心肌干细胞(cardiac stem cells, CSC) 分离、培养的方法, 借助干细胞表面标记c-kit 纯化CSC, 并用5-氮胞苷诱导CSC 分化为心肌细胞。方法:用酶定时消化方法分离提取小鼠心脏组织中的细胞, 进行体外培养;免疫磁珠法纯化c-kit 阳性细胞, 并用流式细胞仪检测纯化后细胞表面标记c-kit、lin 和CD₃₄ 的表达;以免疫细胞化学染色法检测诱导后心肌特异性蛋白T、连接蛋白-43、心肌细胞特异性结蛋白;结合形态学变化, 分析不同诱导条件作用结果之间的差异。结果:从C57BL 小鼠心肌组织中分离消化所得的细胞中, 含有一种小而圆形、折光性强的细胞, 经传代培养的细胞增殖速度比原代细胞明显为快,存在较多的类似于干细胞增殖和形态学特点的细胞。用免疫磁珠法可以分选出高纯度的c-kit⁺CSC, 这种CSC 基本不表达CD₃₄ 和lin 。在不同诱导条件下, 此种CSC 可以分化为搏动的细胞, 并能表达心肌特异性蛋白。结论:从C57BL 小鼠心肌组织中可以获得CSC, 用免疫磁珠法可以分选出表型为c-kit⁺-CD₃₄^--lin^-高纯度的CSC, 经5-氮胞苷诱导或改变CSC 生长的微环境后, 此种细胞可以分化成心肌细胞, 且能形成" 心肌球" 结构。