用晶体混浊分类系统Ⅲ探讨复方水蛭滴眼液防治老年性白内障的临床研究

目的: 用晶体混浊分类系统Ⅲ(lens opacities classification system Ⅲ, LOCS Ⅲ) 探讨复方水蛭(shui zhi, SZ) 滴眼液对老年性白内障的防治作用。方法: 采用以民间验方为基础、以SZ 为主要成分、富含锌和维生素C 的复方SZ 滴眼液, 并以进口抗白内障药物吡诺克辛钠滴眼液(吡诺克辛) 为对照组, 应用LOCS Ⅲ晶体混浊分类系统观察和比较两种滴眼液对老年性白内障的防治作用。结果: 复方SZ 滴眼液组视力提高率(76 %) 、晶体混浊减低率(59 %) 、有效率(66 %) 均明显优于吡诺克辛滴眼液对照组(2.0 %、0 %和2.0 %) 。且无明显的不良反应。结论: 复方SZ 滴眼液是一种安全、有效的抗白内障药物, 疗效优于进口抗白内障药物吡诺克辛滴眼液。     

4 种归肝经明目中药对晶状体上皮细胞凋亡相关基因Bcl-2 和Bax 的调控

目的:探讨4 种归肝经明目中药车前子、青葙子、菊花和熟地对实验性氧化损伤大鼠晶状体上皮细胞(lens epithelial cell, LEC)凋亡相关基因Bcl-2和Bax 的调控。方法:将SD 大鼠双眼随机分成7组:空白对照组、过氧化氢(H₂O₂)组、吡诺克辛(PS)组、车前子组、青葙子组、菊花组和熟地组。无菌操作摘除眼球并在手术显微镜下分离晶状体, 使晶状体孵育在300 μmol·L^-1 H₂O₂ 培养液中复制LEC 凋亡模型, 同时采用4 种归肝经明目中药干预, 置二氧化碳培养箱共同孵育24 h 。取晶状体前囊膜采用免疫组化法检测凋亡相关基因Bcl-2 和Bax 的蛋白表达并进行比较。结果:正常SD 大鼠LEC 中Bcl-2 和Bax 均有表达, Bcl-2 表达较Bax 表达强;H₂O₂组Bcl-2 表达显著下调, Bax 表达显著上调(P <0.01),Bcl-2/Bax 比率下降;与H₂O₂ 组比较, 4 种归肝经明目中药可明显上调Bcl-2 表达, 下调Bax 表达(P <0.01),Bcl-2/Bax 比率上升;PS 与4 种归肝经明目中药的调节作用相似, 但弱于4 种归肝经明目中药的作用(P <0.05)。结论:4 种归肝经明目中药调控凋亡相关基因Bcl-2 和Bax 的表达可能是其抑制LEC 凋亡的分子机制。     

四种归肝经明目中药防护晶状体氧化损伤和上皮细胞凋亡的研究

目的:探讨四种归肝经明目中药车前子、青葙子、菊花和熟地对晶状体氧化损伤及晶状体上皮细胞(lens epithelial cell, LEC) 凋亡的防护作用。方法:将21 只(42 眼) 新西兰白兔晶状体分成7 组:空白对照组、Fenton 组、吡诺克辛钠(PS) 组和车前子、青葙子、菊花及熟地四种归肝明目中药组。采用Fenton 反应复制兔晶状体氧化损伤模型, 在显微镜下观察各组晶状体的混浊程度, 并分别测定晶状体酶性和非酶性抗氧化剂水平。同样, 将21 只(42眼) SD 大鼠双眼随机分成上述7 组, 采用H₂O₂ 复制LEC 凋亡模型, 同时分别采用上述不同药物干预。应用TUNEL 法检测LEC 凋亡及凋亡率、透射电子显微镜观察LEC 超微结构改变和凋亡小体形成。结果:四种归肝明目中药组的晶状体混浊程度均明显轻于Fenton 组;四种归肝明目中药组晶状体中酶性抗氧化剂的活性和非酶性抗氧化剂的含量均明显高于Fenton 组。四种归肝明目中药组LEC 凋亡率均显著低于H₂O₂ 组(P <0.01), 且与PS 组均有显著性差异(P <0.05) 。超微结构研究显示, H₂O₂ 组绝大多数LEC 发生凋亡, 并呈凋亡各期改变;四种归肝明目中药组均仅有少数LEC 发生凋亡, 并多为早期或中期的轻微改变。结论:四种归肝经明目中药均可通过提高晶状体的抗氧化能力对抗晶状体的氧化损伤, 抑制LEC 凋亡, 减轻晶状体的混浊, 且明显优于PS 滴眼液。     

车前子对晶状体上皮细胞氧化损伤防护作用的信号转导机制

目的:研究车前子对过氧化氢(H₂O₂)所致氧化损伤的晶状体上皮细胞(LEC)内钙(Ca²⁺)、环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)的影响,探讨归肝经明目中药防治白内障的细胞信号转导机制。方法:将H₂O₂与传代培养的牛LEC共同孵育复制氧化损伤模型,同时加入车前子水提取液孵育后,用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测LEC活性,用荧光分光光度法检测LEC内钙离子的浓度([Ca²⁺]_i)、放射免疫分析法检测LEC内cAMP和cGMP含量,并探讨不同浓度的车前子及孵育12、24、36h的影响。结果:H₂O₂组LEC活性下降,车前子可明显增强氧化损伤的LEC活性(P<0.01),呈浓度依赖关系和时间依赖关系。H₂O₂组LEC的[Ca²⁺]_i升高,车前子可显著降低由氧化损伤所致的LEC的[Ca²⁺]_i的升高(P<0.01),呈时间-效应关系。H₂O₂组LEC的cAMP浓度升高、cGMP浓度下降,车前子可使氧化损伤的LEC的cAMP水平显著降低(P<0.01)、cGMP水平显著升高(P<0.01),也呈时间-效应关系。结论:车前子可明显抑制LEC氧化损伤及凋亡,[Ca²⁺]_i、cAMP和cGMP信号系统及其相互作用调节生物学效应可能是其细胞和分子生物学的主要作用机制。     

阿魏酸钠防护晶状体上皮细胞氧化损伤的信号转导机制

目的: 探讨阿魏酸钠对氧化损伤的晶状体上皮细胞内 Ca²⁺ 、环磷酸腺苷(cAMP) 、环磷酸鸟苷(cGMP) 的影响, 从细胞信号转导角度揭示天然药物防治白内障的细胞和分子学机制。方法: 采用牛晶状体上皮细胞进行晶状体上皮细胞(LEC) 原代和传代培养, 以含有过氧化氢(H₂O₂) 的培养液孵育 LEC复制氧化损伤模型, 并加入阿魏酸钠单体共同孵育。分别采用四甲基偶氮唑兰(MTT) 比色测定法观察在不同时间和浓度条件下 LEC 活性变化, 采用荧光分光光 度 计 测 定 不 同 时 间 细 胞 内 钙 离 子 浓 度([Ca²⁺]_i) 以及放射免疫分析法测定不同时间 LEC内cAMP 、cGMP 的含量变化。结果: H₂O₂ 组可引起LEC 吸光度值(A)明显下降(P<0.01), 阿魏酸钠能明显增强氧化损伤的LEC活性, 并呈剂量-效应关系和时间-效应关系。氧化损伤的 LEC[Ca²⁺]_i 升高(P<0.01);阿魏酸钠可以降低由 H₂O₂ 引起的细胞[Ca²⁺]_i 的升 高, 并呈时间-效应关系。H₂O₂ 组cAMP 浓度升高;cGMP 浓度下降(P<0.01);阿魏酸钠使 cAMP 水平下调, cGMP 水平上升(P<0.01), 并呈时间-效应关系。结论: 阿魏酸钠可明显抑制 LEC氧化损伤及凋亡, 其作用机制可能是通过钙信号系统、cAMP 信号系统、cGMP 信号系统及其相互作用来调节生物学效应。