siRNA沉默ASIC1a基因对佐剂性关节炎大鼠关节软骨细胞凋亡的影响研究

目的: 探讨小分子干扰RNA(siRNA)技术诱导佐剂性关节炎(adjuvant-induced arthritis,AA)大鼠关节软骨细胞中ASIC1a表达沉默对细胞凋亡的影响。方法: 通过化学合成法合成特异性荧光短链ASIC1a siRNA-FAM,使用Lipofectamine 2000转染试剂盒将ASIC1a siRNA转染入关节软骨细胞,采用荧光显微镜、流式细胞术、实时荧光定量PCR(q-RT-PCR)及Western Blot法检测siRNA转染效率及其对ASIC1a mRNA和蛋白表达的抑制作用。同时采用Annexin-V /PI流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果: ASIC1a siRNA能成功转入软骨细胞,转染后AA大鼠关节软骨细胞中ASIC1a mRNA表达显著低于对照组 (P<0.01),最大抑制率为85.4 %;Western Blot结果显示,转染特异性siRNA后ASIC1a蛋白表达明显低于对照组(P<0.01)。Annexin-V /PI流式细胞术结果表明,与模型组相比,siRNA-3转染引起ASIC1a表达沉默后AA大鼠软骨细胞凋亡明显减少。结论: siRNA介导的AA大鼠关节软骨细胞ASIC1a表达沉默模型是研究酸敏感离子通道对软骨细胞代谢影响的可靠模型,siRNA-3转染对胞外酸化刺激条件下AA大鼠关节软骨细胞凋亡的保护作用可能与其调节ASIC1a的表达有关。     

南宋桥梁建材浅析

南宋时期桥梁建设呈繁荣景象,该文集中对桥梁建材作了一番考察,主要探讨了木、石、竹、铁四种建材在南宋桥梁建设中各自的用途以及建材对桥梁建筑影响的三个方面.     

酸性条件下神经生长因子对大鼠关节软骨细胞酸敏感离子通道1a表达的影响

目的: pH6.0培养条件下观察神经生长因子（NGF）对大鼠关节软骨细胞酸敏感离子通道1a（ASIC1a）基因和蛋白表达的调控作用及其机制。方法: 体外提取培养原代大鼠膝关节软骨细胞,酸性环境下观察细胞NGF高亲和力受体Trk-A的表达情况;不同浓度NGF刺激观察ASIC1a的表达变化;10 ng/mL NGF刺激不同时间胞外信号调节激酶（ERK1/2）及c-fos磷酸化的时效关系,阻断ERK1/2（PD98059 30 μmol/L）后观察c-fos磷酸化水平和ASIC1a的表达;RT-PCR检测ASIC1a基因的表达,Western Blot检测Trk-A、ASIC1a、ERK1/2、pc-fos蛋白的表达。结果: 在酸性环境下NGF的高亲和力受体Trk-A表达比正常环境可高出3倍,ASIC1a的表达随着NGF的浓度升高而升高,10 ng/mL 时趋于稳定;NGF刺激后,ERK1/2及c-fos活化增强,4 h 达到最大水平;阻断了ERK1/2之后,p-c-fos和ASIC1a蛋白表达下降,差异具有显著性(P<0.01)。结论: 在酸性环境下,NGF促进了大鼠关节软骨细胞ASIC1a表达的上调,并且ERK1/2信号通路的活化可能参与了这一过程。     

鬼针草总黄酮对急性炎症的保护作用及可能机制研究

目的: 研究鬼针草总黄酮(TFB)对急性炎症的保护作用与可能机制。方法: 二甲苯诱导急性小鼠耳肿胀,检测耳肿胀度和血清TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8含量;氟氏完全佐剂诱导佐剂性关节炎(AA)大鼠原发性炎症,检测足肿胀度和血清TNF-α、IL-1、IL-2、IL-6、IL-8含量,HE染色观察炎症关节病理学变化,免疫组织化学法检测关节软骨组织ASIC1a蛋白。结果: 小鼠急性耳肿胀和AA大鼠原发性炎症中,模型组动物血清TNF-α、IL-1、IL-6和IL-8含量均明显升高,TFB(100、200 mg/kg) 灌胃给药能降低小鼠耳肿胀度和血清TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8含量,TFB(67、133 mg/kg)可以升高AA大鼠血清IL-2的含量。TFB灌胃给药可以使AA大鼠关节炎性细胞减少,改善病理变化。在AA大鼠原发性炎症中模型组大鼠关节软骨组织ASIC1a表达明显升高,TFB(67、133 mg/kg)组ASIC1a的表达明显降低。相关性分析结果显示,AA大鼠原发性炎症中ASIC1a与血清TNF-α、IL-1、IL-8含量呈正相关。结论: TFB对急性炎症具有保护作用,其抗炎机制可能与调节炎症介质释放有关。     

胞外酸化对体外培养大鼠关节软骨细胞增殖与凋亡及组织蛋白酶K mRNA表达的影响

目的: 探讨不同胞外pH环境对体外培养的大鼠关节软骨细胞增殖、凋亡的影响,以及大鼠关节软骨细胞中组织蛋白酶K的表达与胞外酸化的关系。方法: Ⅱ型胶原酶消化法从大鼠关节软骨中分离软骨细胞;细胞传代培养后分为4组分别在pH7.4、pH6.5、pH6.0、pH5.5不同的胞外酸化环境下培养3 h,MTT法检测软骨细胞活力,Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态,Annexin-V/PI双染法检测软骨细胞的凋亡率,实时荧光定量PCR检测组织蛋白酶K基因的表达。结果: 与pH7.4 组比较其他各组软骨细胞增殖均受到抑制,其中pH5.5、pH6.0与pH7.4相比差异有重要的统计学意义(P<0.01),pH5.5和pH6.0组可见较多的凋亡细胞,且流式细胞仪检测的凋亡率明显高于pH7.4组(P<0.01);组织蛋白酶K的表达与酸性程度成正相关。结论: 胞外酸化环境下能明显抑制体外培养软骨细胞增殖、促进软骨细胞凋亡,并且酸性环境能增加组织蛋白酶K的表达,这为类风湿关节炎中关节软骨的破坏发生机制提供了实验依据。     

“榷货盐钱以赡军费”——南宋初期(1127-1141)江淮地区驻军军费考

南宋初期江淮地区屡遭宋金战争的破坏,地方社会经济残破不堪,主要依赖淮东地区盐场的专营收入供养了本地区十万宋军。从政治史的视角看淮盐的历史作用,实为南宋建立的财政保障。南宋初期宋廷主动谋划防御江淮地区,不仅是守卫领土的要求,更是维持王朝财政安全的必然选择。然而,宋廷以"榷货盐钱"为主的财政达到收入的极限,若再增加军费,采取进攻的战略恢复中原故土,从财政上已无实现的可能。