SUMO E3连接酶介导雄激素受体的转录促进乳腺癌他莫昔芬耐药

目的：探讨SUMO化的雄激素受体（androgen receptor, AR）参与他莫昔芬耐药的机制以及SUMO抑制剂银杏酸在耐药中的作用。方法：通过Real-Time PCR检测亲本细胞MCF-7W和耐药细胞MCF-7R中AR mRNA水平,Western blot检测MCF-7W和MCF-7R细胞中AR蛋白水平以及SUMO水平,免疫沉淀和染色质免疫沉淀（CB/IP）检测MCF-7R细胞染色质中AR与SUMO E3连接酶PIAS1、HSP27相互作用,荧光报告基因实验检测SUMO化AR的转录活性,CCK-8法、台盼蓝拒染法分别检测细胞活性和细胞活力。结果：MCF-7R细胞中AR的mRNA和蛋白表达水平表达量明显高于MCF-W7细胞（P<0.05）,并且MCF-7R细胞中显示高SUMO化的AR;进一步研究发现MCF-7R细胞染色质中AR与SUMO E3连接酶PIAS1、HSP27存在明显相互作用,即SUMO化的AR是由E3连接酶修饰的;双荧光素酶报告基因试剂盒检测发现雄激素R1881呈浓度依赖性增强SUMO化的AR的转录活性;与单用银杏酸相比,10 μmol/L银杏酸联合10 μmol/L恩杂鲁胺治疗处理MCF-7R细胞3 d后,细胞数明显降低,细胞死亡数明显增加（P<0.05）。 结论：他莫昔芬耐药机制可能是由于高活性SUMO化的AR使AR转录增强、活性增高,SUMO抑制剂银杏酸联合AR拮抗剂恩杂鲁胺可成为治疗他莫昔芬耐药的新策略。     

氧化苦参碱通过调控上皮间质转化抑制三阴性乳腺癌细胞侵袭转移

目的: 探讨氧化苦参碱对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231生长增殖及其对迁移能力的影响和机制。方法: CCK-8活细胞计数法分析氧化苦参碱不同浓度（0、1、2、4、6、8、10、20 mg/mL）在不同时间（24、48、72 h）对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231生长增殖的影响，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡，Transwell法观察氧化苦参碱对MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力的影响，Q-PCR法检测EMT相关因子Snail-2和E-cadherin表达水平。结果: 与对照组比较，浓度为2、4、6、8、10、20 mg/mL的氧化苦参碱处理MDA-MB-231细胞24、48和72 h后，对细胞的生长呈时间和剂量依赖性的抑制作用。流式细胞实验提示2 mg/mL氧化苦参碱可使G0/G1期细胞数明显增加（P<0.05），S期和G2/M期的细胞数明显减少（P<0.05），细胞生长阻滞于G0/G1期。中、高浓度氧化苦参碱（4 mg/mL、6 mg/mL）处理12 h能明显抑制MDA-MB-231的侵袭能力，抑制Snail 2 mRNA的表达（P<0.01），上调E-cadherin mRNA和蛋白水平的表达（P<0.01）。结论: 氧化苦参碱对三阴性乳腺癌细胞生长和迁移侵袭有抑制作用，具有潜在的抗肿瘤生长和转移作用。     

CD40调节胰腺癌细胞生物学行为的研究

目的: 研究CD40L对胰腺癌细胞生物学特性、干性的影响。方法: CCK-8活细胞计数法分析CD40可溶性配体（sCD40L）不同浓度（0、1、2、4 μg/mL）在不同时间对人胰腺癌细胞系panc02生长增殖的影响,AnnexinV/PI双染法检测凋亡;细胞划痕实验检测迁移的改变。Q-PCR检测4 μg/mL sCD40L处理panc02 48 h后c-Myc、OCT-4、Sox-2水平的改变。建立Balb/c裸鼠胰腺癌荷瘤模型,随机分为2组,对照组（生理盐水）和sCD40L（10 mg/kg）组,分别腹腔注射sCD40L 10 mg/kg以及等体积生理盐水,每天注射3次,游标卡尺测量0、7、14、21、28 d时肿瘤体积。结果: 与对照组比较,浓度为1、2、4 μg/mL的sCD40L处理panc02 96 h时可显著抑制panc02的增殖（P＜0.01）,并促进panc02的凋亡（P＜0.01）,并呈剂量依赖性地抑制panc02的迁移能力（P＜0.01）;sCD40L 4 μg/mL组可明显抑制panc02细胞的c-Myc、OCT-4、Sox-2的表达（P＜0.01）。在裸鼠荷瘤实验中,与对照组比较,sCD40L处理28 d明显抑制肿瘤体积（P＜0.01,252±13 vs. 189±9）。结论: CD40通路的活化能够抑制胰腺癌细胞增殖迁移、促进凋亡,同时抑制胰腺癌细胞系体内的增殖能力,而这一效应可能与CD40L抑制胰腺癌细胞系干性相关。     

利用Cre/loxP系统构建乳腺细胞特异性敲除SENP7基因的小鼠模型

目的：应用Cre-loxP系统构建乳腺细胞SENP7基因条件性敲除的小鼠模型并进行鉴定。方法：将SENP7flox/+杂合子小鼠进行杂交，PCR法鉴定为SENP7flox/flox纯合子小鼠，再与MMTV-Cre杂合子小鼠进行数代杂交，基因型鉴定并筛选获得MMTV-Cre×SENP7flox/flox小鼠，即实验所需的SENP7基因特异性敲除小鼠。采用Real-Time PCR、Western blot和HE染色鉴定SENP7敲除效果，观察乳腺组织形态。结果：PCR基因扩增筛选出基因型为MMTV-Cre×SENP7flox/flox小鼠。与MMTV-Cre×SENP7+/+小鼠相比，MMTV-Cre×SENP7flox/flox小鼠乳腺SENP7基因的mRNA、蛋白表达水平显著降低，乳腺腺体数量明显减少。 结论：本研究利用Cre-loxP技术成功构建了乳腺特异性敲除SENP7基因的纯合子小鼠，为进一步研究SENP7基因在乳腺肿瘤发生发展中的作用提供了优良的工具。     

高尿酸合并高血压患者URAT1 6092(T/C)基因多态性对氯沙坦降尿酸疗效的影响

目的: 探讨尿酸盐阴离子转运体(Urate Transporter 1,URAT1)SNP6092(T/C)基因多态性对高尿酸血症合并原发性高血压患者服用氯沙坦降尿酸疗效的影响。方法: 应用PCR-RFLP方法对101名高尿酸血症合并原发性高血压患者和117名健康对照者进行基因分型,并且所有患者均每天口服氯沙坦药物 100 mg,连服2周。测定用药前后的血压、血尿酸(Ur)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、胆固醇(CHOL), 高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c), 低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)和甘油三酯(TG)。结果: 服用氯沙坦后,突变基因型患者(TC/CC)的Ur和Cr的降低水平均明显低于TT基因型患者(P<0.05),并且TC和CC型患者的Ur降低幅度(1.34%±2.12%,-0.2%±3.8%)也明显低于TT基因型患者(22.58%±14.46%)(P<0.05)。结论: URAT1基因6092T/C遗传变异影响氯沙坦的降尿酸疗效,并且可能是氯沙坦降尿酸潜在的遗传靶点。