木瓜蛋白酶对MPA诱导的单核细胞分泌和黏附功能的抑制作用及分子机制初步研究

目的: 观察木瓜蛋白酶对单核细胞-血小板聚集物（MPA）诱导的单核细胞分泌和黏附功能的抑制作用,并初步探讨其分子机制。方法: 分离人外周血单核细胞和富血小板血浆（PRP）,检测20 U/L木瓜蛋白酶不同作用方式下凝血酶和花生四烯酸（AA）诱导的MPA形成及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。将实验分为0（对照）、20、80 U/L木瓜蛋白酶组,分别以ELISA、流式细胞术和显微镜检查测定木瓜蛋白酶与单核细胞共孵育后MPA诱导的单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和组织因子（TF）释放、CD11b和CC趋化因子受体2（CCR2）表达水平以及单核细胞与人脐静脉内皮细胞黏附率,再以Western blot检测单核细胞Akt磷酸化（p-Akt）和环氧化酶-2（COX-2）表达水平。结果: 20 U/L木瓜蛋白酶与单核细胞和血小板共孵育时显著降低凝血酶和AA诱导的MPA形成和TNF-α 水平（P<0.01）。20 U/L木瓜蛋白酶组MCP-1和TF水平,CD11b和CCR2表达率,单核细胞与内皮细胞黏附率均显著低于对照组（P<0.01）,80 U/L组对五者的抑制率显著高于20 U/L组（P<0.01）。木瓜蛋白酶显著抑制p-AKT和COX-2表达,80 U/L组p-Akt和COX-2光密度比值显著低于20 U/L组（P<0.01）。结论:木瓜蛋白酶可通过抑制Akt磷酸化和COX-2表达途径而抑制MPA诱导单核细胞活化后的释放和黏附功能,从而可能有助于预防动脉粥样硬化。