荧光显微镜观察银杏内酯B对大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的：建立一种简便、快速的细胞凋亡检测方法，探讨银杏内酯B（GB）对心肌细胞凋亡的影响。方法：体外培养大鼠心肌细胞，利用荧光显微镜观察经Hoeehst 33258染色的心肌细胞，记录凋亡细胞核形态学改变并计算凋亡百分率。结果：H2O2可诱导心肌细胞发生凋亡，与H2O2组相比，GB组大鼠心肌细胞凋亡率明显降低，并有显著性差异（P〈0．05）。结论：银杏内酯B对大鼠心肌细胞凋亡具有保护作用。     

高糖诱导的大鼠雪旺细胞凋亡的流式细胞术

探讨流式细胞术在检测高糖诱导的早期雪旺细胞凋亡中应用。选用培养大鼠的雪旺细胞,将细胞分为正常对照组(5.6mmol/L葡萄糖),高糖组(50mmol/L葡萄糖),高渗出组(50mmg/L甘露醇),培养7天后,收集细胞。48h后应用流式细胞术采用Annexin-V/PI检测法和JC-1检测早期细胞的细胞膜凋亡率和线粒体膜电位变化。结果表明:高糖与正常糖浓度处理的雪旺细胞比较,高浓度葡萄糖诱导雪旺凋亡率明显高于正常葡萄组的凋亡率,线粒体膜电位明显高于正常对照组。高渗透组与正常对照组凋亡率及线粒体无明显升高。通过采用流式细胞细胞术结合单克隆抗体,能够快速、灵敏和准确检测雪旺细胞在细胞膜的通透性改变和线粒体膜电位变化。为研究雪旺细胞凋亡提供客观、直接、准确的方法。     

多参数分析超抗原SEB诱导小鼠NKT细胞变化的流式细胞术

探讨采用四色荧光探针检测超抗原SEB诱导小鼠NKT细胞的多参数流式细胞术.选用培养C57BL/J小鼠脾淋巴细胞,四色免疫荧光标记FITC、PI、PerCP及APC,应用FACS Calibur型流式细胞仪,以Cellquest软件获取、分析及储存.经SEB诱导后流式细胞术可同时检测到淋巴细胞亚群及NKT细胞CD3 NK1.1 ,CD4 NK1.1 ,CD8 NK1.1 的变化.第10d时,CD3 /NK1.1 百分率达到最高.多参数的流式细胞术为研究NKT细胞功能提供一种快速、客观及全面多指标的检测手段.     

用尺寸排阻色谱测定蛋白质的构象转化点

建立了用尺寸排阻色谱研究蛋白质构象改变转化点的方法,测定了核糖核酸酶A在尺寸排阻色谱系统中的分配系数Kd,并用荧光检测器监测了加热所导致的蛋白质内源性荧光变化,从而计算出了核糖核酸酶A的热变性转化温度.通过液相色谱梯度洗脱系统在线增加尿素浓度,测定Kd值的动态变化,计算出使溶菌酶发生变性的尿素溶液浓度.用所建立的方法绘制了蛋白质变性前后的尺寸排阻色谱工作曲线,探讨了溶液pH对核糖核酸酶A热稳定性的影响.     

流式细胞术快速检测T细胞亚群和NKT细胞亚群的免疫荧光变化

利用单克隆抗体与免疫荧光结合的特异性,探讨流式细胞仪检测T细胞亚群和NKT细胞亚群免疫荧光变化。选用培养C57BL/7小鼠脾细胞分别经SEB.COA活化,收集体外扩增10d淋巴细胞为效应细胞,经免疫荧光探针FITC、PI、PerCP和APC标记可同时检测各亚群免疫荧光变化,结果表明SEB活化主要是NKT细胞,它们与COA活化NKT细胞亚群相比比率显著增高。COA活化细胞主要是T细胞亚群。依据免疫荧光原理应用流式细胞术,为进一步研究NKT细胞结构和功能提供一种快速的检测手段。     

雌二醇诱导人正常肝细胞的凋亡以及对细胞周期的影响

目的：观察雌二醇对诱导人正常肝细胞的的凋亡,并且研究其对细胞周期的影响。方法：采用人肝细胞为实验对象,用he染色观察细胞形态学变化;流式细胞记数仪检测细胞周期,AnnexinⅤ/PI双重染色定量检测早期细胞凋亡及Bcl-2/Bax的表达改变。结果：雌二醇48h可以明显抑制正常肝细胞株的增生与活力,诱导细胞的凋亡,且对细胞周期的影响非常显著。结论：其机制可能与Bcl-2/Bax表达的下调有关。     

眼球后静脉注射建立小鼠非清髓同种异基因骨髓细胞移植模型

目的：验证利用眼球后静脉注射（retro-orbital injection,ROI）建立小鼠非清髓同种异基因骨髓细胞移植（Non-allogeneic myeloablative bone marrow cell trans-plantation,N-Allo-BMT）模型的可行性和安全性,寻找替代尾静脉注射（tail vein in-jection,TVI）进行小鼠细胞移植的理想途径。方法：对比10名志愿者从练习到掌握ROI与TVI所需时间;经ROI建立N-Allo-BMT模型,利用外周血瑞氏染色及流式细胞计数,连续观测外周血像及嵌合情况,观察移植物抗宿主疾病（GVHD）发生情况。结果：所有志愿者均在1~3h内能熟练完成ROI,且无注射相关并发症发生;在移植10d后,受体小鼠完全恢复造血,外周血呈供体完全嵌合;在移植75d内,83.3%的受体死于严重GVHD。讨论：ROI是一种简便、安全、可靠的小鼠骨髓细胞移植方法,可代替操作难度较大的TVI,值得推广。     

检测早期细胞凋亡的流式细胞术

探讨了采用多参数流式细胞术分析氧化应激造成的心肌细胞凋亡过程中线粒体膜电位的改变。应用荧光探针JC-l可敏感检测到这种改变，是一种检测早期细胞凋亡改变的理想手段。     

应用流式细胞术检测大鼠心肌细胞缺氧/复氧后内质网应急引起细胞凋亡

利用流式细胞仪观察西洋参茎叶总皂甘通诱导大鼠心肌细胞后内质网应急引起细胞凋亡。选用原代培养心肌细胞,将心肌细胞分为正常细胞对照组,缺氧/复氧组和缺氧/复氧后加入西洋参茎叶总皂苷组。按照40mg/L,80mg/L,160mg/L浓度培养24h后,应用流式细胞仪采用Annexin-V/PI诱导凋亡。结果显示应用流式细胞仪检测最终浓度为160mg/L西洋参茎叶总皂苷凋亡率明显低于缺氧/复氧组。流式细胞仪检测由内质网应急诱导细胞凋亡对研究细胞凋亡的机理提供一种快速、准确检测方法。