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目的建立MDCK细胞的主细胞库及工作细胞库,并进行检定,同时评价其生物学特性。方法从欧洲细胞保藏中心(European Collection of Authenticated Cell Culture,ECACC)引进1株MDCK细胞,经传代扩大培养后,分别建立主库及工作细胞库。按照《中国药典》三部(2015版)规定的方法对细胞库进行细胞活力、细胞形态、无菌、支原体及细胞内外源病毒因子检查,并对细胞生长状况、传代稳定性、流感病毒敏感性进行检测。结果建立的MDCK细胞主种子库及工作种子库细胞形态呈不规则的上皮样细胞状,生长状态良好,细胞活率分别为96.0%和95.5%,无菌、支原体及细胞内外源病毒因子检查结果均合格。MDCK细胞生长曲线均呈S型,培养48~96 h进入对数生长期,随后进入平台期。连续传10代48 h细胞活率在93.0%~95.5%之间,较稳定。MDCK细胞对流感病毒较敏感,对B型流感病毒的敏感性高于A型流感病毒。结论建立的主细胞库及工作细胞库各项检测结果均符合《中国药典》规定,具有良好的传代稳定性及流感病毒敏感性。 相似文献
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表达HBsAg及rhIFNα2b融合蛋白的人参细胞株的建立 总被引:1,自引:1,他引:0
目的建立表达HBsAg及rhIFNα2b融合蛋白的人参细胞株。方法采用PCR方法分别扩增HBsAg及rhIFNα2b基因,以GS linker连接后,克隆入表达质粒pBI121,构建植物细胞表达质粒pBISI,转化农杆菌LBA4404,感染人参愈伤组织细胞。经G418筛选抗性细胞株,提取细胞基因组DNA,进行PCR检测;应用ELISA法检测HBsAg及rhIFNα2b的表达;通过Western blot分析表达蛋白的反应原性。结果重组表达质粒pBISI经酶切鉴定,表明构建正确。筛选得到3株正常生长的人参细胞株,基因组DNA扩增得到约1200bp的融合基因片段;经ELISA检测,其中1株能够表达HBsAg及rhIFNα2b;表达的蛋白与鼠抗HBsAg血清在相对分子质量35000处出现特异条带。结论已获得了表达HBsAg及rhIFNα2b融合蛋白的人参细胞株。 相似文献
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狂犬病病毒糖蛋白真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的构建狂犬病病毒糖蛋白基因的真核细胞表达载体,并在COS-7细胞中表达。方法培养狂犬病病毒,提取负链RNA,采用RT-PCR的方法扩增糖蛋白基因,并将该基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(A)上,通过脂质体介导的方法,转染COS-7细胞,用ELISA及间接免疫荧光法检测狂犬病病毒糖蛋白在COS-7细胞中的瞬时表达。结果成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(A)/G,转染COS-7细胞后,在其培养上清中未检测到狂犬病病毒糖蛋白的表达。间接免疫荧光试验表明,pcDNA3.1(A)/G能有效地表达狂犬病病毒糖蛋白于转染的COS-7细胞膜上。结论真核细胞表达载体pcDNA3.1(A)/G能够在COS-7细胞中表达狂犬病病毒糖蛋白,为开发狂犬病病毒糖蛋白基因工程疫苗奠定了基础。 相似文献
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姚为民 《中国食品卫生杂志》1993,(1)
汽水、果汁及可乐在饮料类中占较大的比例,其铜的卫生标准执行GB2759—81冷饮卫生标准(铜:≤10mg/l)。铜在汽水、果汁、可乐中的分布情况如何,能否象其它饮料一样,不检测铜指标?我们分析了200件汽水、果汁、可乐中铜、铅、砷含量,现报告如下。 相似文献
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在某银行总行下而的一个省分行里工作的助理工程师,算得上是一个庞大的银行信息网络下的小小的神经末梢.然而这个神经末梢划干出了一桩惊天动地的事来。先不说该国家银行被骗走巨款75万元.仅为侦破此案公安部门用去的机票就达20多公分高。那么一个小小的神经末梢怎么会成了一匹害“公”之马的呢?这还得从那个密钥说起。 相似文献
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针对一款全浮式商用车驾驶室悬置系统,通过ADAMS软件的交互式建模方法,建立了悬置系统的多体动力学模型。分别通过振动模态和传递特性两种方法对模型进行仿真分析,较全面地获得了驾驶室悬置系统的振动特性。通过相应的试验对仿真结果进行了验证,证明了模型具有足够的精度,可以用来分析评价驾驶室悬置系统的隔振性能。 相似文献
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目的获得IL-2绿脓杆菌外毒素A嵌合蛋白,用于相关疾病的治疗。方法用PCR方法扩增分 离IL-2和PEA的基因,将IL-2基因的3’端与绿脓杆菌外毒素A基因的5’端连接后克隆至pBV220上,转化大肠杆菌 DH5a。挑取菌落培养,快速提取质粒进行酶切,并在温控条件下表达。结果经鉴定,获得重组质粒pBV/IL-2/ PEA。温控诱导表达后SDS-PAGE分析表明,在51 000处有蛋白表达带。以鼠抗人IL-2单克隆抗体经免疫印迹验 证,该表达蛋白为所设计的嵌合蛋白。结论本研究建立了一种制备IL-2/PEA嵌合蛋白的方法,该方法也可用于 表达其他蛋白。 相似文献