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目的原核表达并纯化小鼠白细胞介素-13受体α2胞外区(sIL-13Rα2)。方法将sIL-13Rα2基因克隆入原核表达载体pROEXHTa,构建重组表达质粒pROEXHTa/sIL-13Rα2,经双酶切鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。薄层扫描分析目的蛋白的表达量,并对其进行表达形式分析及Westernblot鉴定。镍柱亲和层析纯化目的蛋白。结果重组表达质粒经双酶切鉴定证明构建正确。表达的sIL-13Rα2蛋白相对分子质量约为36200;诱导6h,重组蛋白的表达量最高,约占菌体总蛋白的45%;重组蛋白以包涵体形式存在,可与大鼠抗小鼠sIL-13Rυ2单克隆抗体发生特异性反应;纯化后纯度大于95%。结论已成功表达并纯化了sIL-13Rα2,为进一步探讨其治疗支气管哮喘奠定了基础。 相似文献
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小鼠可溶性IL-5受体α胞外区基因的克隆及原核表达 总被引:1,自引:1,他引:0
目的克隆并原核表达小鼠可溶性IL-5受体α(sIL-5Rα)胞外区基因。方法采用RT-PCR从BALB/c小鼠脾脏组织中分别扩增sIL-5Rα胞外区前后段基因片段,酶切后将两段基因连接,插入原核表达载体pPROEX中,构建重组表达质粒pPROEX/sIL-5Rα,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达。采用SDS-PAGE和Western blot检测目的蛋白的表达。结果重组表达质粒经双酶切和DNA测序,证实构建正确。表达的sIL-5Rα胞外区蛋白相对分子质量约36100,表达量约占菌体总蛋白的30%,且可与兔抗小鼠sIL-5Rα单抗发生特异性免疫反应。结论已成功克隆并原核表达了小鼠sIL-5Rα胞外区基因,为进一步探讨sIL-5Rα对哮喘的治疗作用及开发新的哮喘治疗药物奠定了基础。 相似文献
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目的观察可溶性白细胞介素-5受体α(Soluble interleukin 5 receptorα,sIL-5Rα)与可溶性白细胞介素-13受体α2(sIL-13Rα2)联合应用对哮喘小鼠气道高反应性(Airway hyperresponsiveness,AHR)及气道炎症的影响。方法将40只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、sIL-5Rα组、sIL-13Rα2组和sIL-5Rα+sIL-13Rα2组,除正常对照组外,其余各组以鸡卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)致敏和激发,建立哮喘模型,sIL-5Rα、sIL-13Rα2和sIL-5Rα+sIL-13Rα2组每次激发前30 min分别经腹腔注射sIL-5Rα100μg、sIL-13Rα2 100μg和sIL-5Rα100μg+sIL-13Rα2 100μg,正常对照组及哮喘组则用生理盐水替代。末次激发24 h后,检测各组小鼠经不同浓度氯化乙酰胆碱激发后的肺阻力,对支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavagefluid,BALF)进行细胞计数,HE染色观察肺组织的病理变化,ELISA法检测BALF中IL-5和IL-13水平。结果与正常对照组相比,经氯化乙酰胆碱激发后,哮喘组肺阻力显著增加(P<0.01);与哮喘组相比,sIL-13Rα2和sIL-5Rα+sIL-13Rα2组肺阻力显著降低(P均<0.01),sIL-5Rα+sIL-13Rα2组降低更明显(P<0.01)。与正常对照组相比,哮喘组BALF中白细胞总数和嗜酸性粒细胞(Eosinophil,EOS)数均显著增加(P均<0.01),肺组织损害明显;与哮喘组相比,3个治疗组BALF中白细胞总数和EOS数均显著降低(P均<0.01);与sIL-5Rα和sIL-13Rα2组相比,sIL-5Rα+sIL-13Rα2组BALF中白细胞总数和EOS数进一步降低(P均<0.01);3个治疗组炎症细胞浸润明显减轻,炎症反应轻微,其中sIL-5Rα+sIL-13Rα2组病理变化进一步减轻。与正常对照组比较,哮喘组小鼠BALF中IL-5和IL-13水平显著升高(P<0.01);与哮喘组相比,sIL-5Rα+sIL-13Rα2组小鼠IL-5和IL-13水平均显著降低(P<0.01)。结论 sIL-5Rα与sIL-13Rα2联合应用可明显降低哮喘小鼠AHR,减轻气道炎症。 相似文献
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目的克隆并在毕赤酵母中表达小鼠sIL-13Rα2基因。方法提取小鼠脾脏细胞总RNA,逆转录为cDNA,应用分段PCR的方法将sIL-13Rα2基因定向克隆至酵母表达质粒pPICZα-A,并转染至毕赤酵母GS115(his4)菌株,进行目的蛋白的诱导表达。表达的蛋白经SDS-PAGE和Western blot,进行分析。结果重组表达质粒pPICZα-A/sIL-13Rα2经酶切鉴定,表明目的基因为正向插入。重组酵母菌的PCR鉴定结果显示,目的基因片段已插入酵母染色体中。目的蛋白表达量约占菌体总蛋白的30%,每升发酵液约含2mg重组蛋白。重组蛋白可与兔抗小鼠sIL-13Rα2单抗发生特异性反应。结论已成功克隆并在毕赤酵母中表达了小鼠sIL-13Rα2基因,为应用sIL-13Rα2蛋白治疗哮喘及其他过敏性疾病奠定了基础。 相似文献
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在无线传感器网络的簇间路由协议中,簇头单跳或者多跳通信,都会导致簇头能量消耗不均衡。为了均衡能量消耗,新的协议在LEACH-C协议基础上,引入一个有关距离的阈值,若簇头距离基站的距离小于该阈值,则进行单跳通信;若簇头距离基站的距离大于该阈值,则进行多跳通信,同时提出一种保证时延的簇间多跳路由协议(Distance and Delay Based Cluster Routing Protocol)DDCR协议。经过仿真实验,验证了该方法的可实现性,有效地降低了簇头节点的能量消耗,均衡了网络负载。 相似文献
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