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目的构建携带绿色荧光蛋白(GFP)标签的表达PLCε基因shRNA的重组腺病毒质粒Ad-U6-PLCε,为应用基因沉默技术研究膀胱癌的基因治疗奠定基础。方法将干扰质粒pGenesil-PLCε及阴性对照质粒pGenesil-NP的表达启动子U6及shRNA序列克隆至带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的穿梭质粒pAdTrack,经酶切及测序鉴定正确后,将重组穿梭质粒经PmeI线性化,转化感受态AdEasier。重组pAdEasy-U6-PLCε质粒经PacI线性化后,转染HEK-293细胞,包装重组腺病毒Ad-U6-PLCε,经大量扩增后测定病毒滴度,RT-PCR及Western blot检测T24细胞内PLCε的表达情况。结果酶切及测序鉴定证实pAdTrack-U6-PLCε及重组pAdEasy-U6-PLCε质粒构建正确,并成功转染至HEK-293细胞,重组腺病毒Ad-U6-PLCε滴度达1.5×1012,经重组腺病毒感染的T24细胞内PLCεmRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论已成功构建针对PLCε基因的shRNA重组腺病毒载体Ad-U6-PLCε,为应用基因沉默技术研究PLCε对膀胱癌发生发展的作用奠定了基础。 相似文献
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在家具生产中,为使家具造型优美流畅,经常需要制作弯曲部件,薄板多层胶合弯曲部件是最常用的方法之一,也是制造大幅面弯曲板件的主要方法。本文论述影响弯曲成型工艺的要点,分析薄板胶合弯曲质量的影响因素,为控制产品质量提供指导。 相似文献
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项目化课程是以企业真实工作任务为项目载体,在一体化教室仿真环境中,学生通过资讯、计划、决策、实施、检查、评估6个完整的工作步骤完成学习任务。课程教学采用项目导向、任务驱动、教、学、做合一,理论与实践结合的教学模式,实现在工作中学习。通过学生自主学习,掌握专业知识,训练实践技能,培养分析问题、解决问题能力,从而形成综合职业能力。《家具结构设计》课程是家具设计专业核心课程,该课程具有实践性和专业性强的特点。通过课程的项目化改革与实践,学生在真实的工作情景中完成学习性的工作任务,进而培养和锻炼创造性思维能力和专业实践技能,培养学生的综合职业素质,使其能够胜任家具企业结构设计师职业岗位的工作。 相似文献
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目的 研究比较不同品系多花黄精的药用、营养价值差异,并进行综合评价。方法 以DH-1、DH-2、DH-3、DH-4、DH-5、DH-6 6个品系多花黄精地下部分作为实验材料,分别测量其水分、灰分、浸出物、多糖、总黄酮、总皂苷、总酚、可溶性糖、还原糖、脂肪、蛋白质、矿质元素指标,并利用隶属函数法进行综合评价。结果 多花黄精不同品系间营养价值和药用价值均存在显著差异。其中,DH-6的浸多糖含量最高,DH-3浸出物含量最高,DH-4的总黄酮、总酚和脂肪含量最高,DH-2的总皂苷和还原糖含量最高,DH-1的可溶性糖和蛋白质含量最高;6个品系均含有大量元素和微量元素。综合评价分析发现,6个品系的药用价值综合评分大小顺序依次为DH-1>DH-3>DH-4>DH-6>DH-5>DH-2,DH-1的综合评分最高;6个品系的营养指标综合评分大小顺序依次为DH-1>DH-2>DH-6>DH-4>DH-3>DH-5,DH-1的综合评分最高。结论 DH-1既适合药用也适合食用,同时也可按照相应需求对其展开进一步的开发及利用。 相似文献
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根据实际工作经验,对四川宜宾高空站的L波段雷达探测系统使用过程中出现的一些特殊情况,如:T0、R0输入错误、频率漂移致使凹口跟踪不上、放球时间和启动放球键的时间不同步,湿度变化异常等问题进行了总结分析,给出了相应的解决方法,可供从事高空探测的业务技术人员参考。 相似文献
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基于Qu ECh ERS的快速、简便的优势,建立了一种同时测定食品中展青霉素(PAT)、呕吐毒素(DON)、黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2(AFB1、AFB2、AFG1、AFG2)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、赭曲霉毒素A(OTA)等8种真菌毒素的方法。样品采用乙腈-水-乙酸(70:29:1,V/V/V)混合提取液提取,经乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)、碳十八键合硅胶(C18)、石墨化碳黑(GCB)和无水硫酸镁混合型固相分散净化,净化液过滤膜后通过Phenomenex Luna C18(2)100?(150×2.0 mm,3μm)色谱柱分离,以电喷雾电离串联质谱多反应监测模式(MRM)进行确证和检测,氘代同位素内标法定量,分别对流动相、提取溶剂、固相净化剂的选择进行了优化。结果表明:8种真菌毒素显示了良好的线性关系(r≥0.9984);在低、中、高3个添加水平下目标物的加... 相似文献
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制备并研究了纳米级图形化蓝宝石衬底.采用磁控溅射技术在蓝宝石衬底上沉积 SiO2薄膜,利用自组装方法在SiO2薄膜上制备单层聚苯乙烯(PS)胶体球阵列,利用感应耦合等离子体干法刻蚀将周期性PS胶体球的图形转移到SiO2薄膜上,通过湿法腐蚀制备了纳米级图形化蓝宝石衬底.利用扫描电子显微镜对胶体球掩膜、SiO2纳米柱掩膜和图形化蓝宝石衬底结构进行了观察,研究了湿法腐蚀蓝宝石衬底的中间产物对刻蚀的影响,分析了腐蚀温度和腐蚀时间对蓝宝石衬底的影响.结果表明,湿法腐蚀的中间产物会降低蓝宝石衬底的刻蚀速率.蓝宝石衬底的腐蚀速率随着腐蚀温度的升高而加快;在同一腐蚀温度下,随着腐蚀时间的增加,图形尺寸进一步减小. 相似文献
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目的探讨干扰素γ(interferonγ,IFNγ)对人肾癌786-0细胞增殖的抑制作用及其可能的机制。方法用不同浓度(1 000、2 000、3 000、4 000和5 000 U/ml)的IFNγ作用人肾癌786-0细胞不同时间,CCK-8法检测细胞增殖抑制率;将786-0细胞分为试验组(加入900 U/ml IFNγ)和细胞对照组(未作任何处理),作用48 h后,流式细胞术检测786-0细胞细胞周期的分布,RT-PCR法检测细胞中肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)基因mRNA的转录水平,Western blot法检测细胞中有丝分裂抑制缺陷蛋白1(mitotic arrest deficiency 1,MAD1)的表达水平;将腺病毒质粒hepaCAM及空腺病毒质粒瞬时转染786-0细胞,Western blot检测细胞中hepaCAM及MAD1蛋白的表达水平。结果 IFNγ可抑制786-0细胞的增殖,且呈时间-剂量依赖性(P0.05);与细胞对照组相比,试验组细胞G1期细胞比例、hepaCAM基因mRNA的转录水平及MAD1蛋白的表达水平均明显升高(P均0.01);转染腺病毒质粒的786-0细胞中hepaCAM和MAD1蛋白的表达水平明显高于空腺病毒质粒组及空白对照组(P0.05)。结论 IFNγ可能通过hepaCAM-MAD1途径使细胞周期阻滞于G1期,从而抑制肾癌786-0细胞增殖,本实验为进一步研究肾癌的发生发展机制及有效治疗途径奠定了基础。 相似文献