沙门氏菌重组酶聚合酶检测方法的建立及应用

摘 要：建立一种重组酶聚合酶扩增技术（recombinase polymerase amplification,RPA）检测沙门氏菌（Salmonella）的方法。本研究依据沙门氏菌侵袭蛋白A基因（invA）的保守序列设计特异性引物,通过对反应时间的优化,建立的RPA方法在38?℃水浴锅中恒温反应20?min,即可实现对目的片段的有效扩增;除沙门氏菌外,其他26?种食源性致病菌均无扩增,具有良好的特异性;以沙门氏菌基因组DNA作为模板,该方法的检测灵敏度为1.1×10－3?ng/μL,与本研究应用的实时荧光聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction,PCR）方法一致;人工污染实验表明,当羊肉、鸡肉和西兰花样品污染量为4?CFU/25?g,增菌8?h,即可通过RPA方法检出沙门氏菌。在人工污染实验中,RPA和PCR检测结果一致。本研究建立的沙门氏菌的RPA检测方法特异性强、操作简单、为食源性致病菌的鉴定提供了一种新的方向。     

单核细胞增生李斯特氏菌实时荧光RPA检测方法的建立及应用

本研究旨在建立一种快速检测单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,LM)的实时荧光重组酶聚合酶扩增(real-time RPA)方法。基于LMhly A基因保守序列,设计合成特异性RPA引物和exo探针,所建立的LM real-time RPA方法能够在37℃等温条件下20 min内完成扩增。该方法仅对LM基因组DNA为阳性扩增,对其它20种致病菌基因组DNA的扩增均为阴性;以LM纯培养菌液的基因组DNA进行10倍列梯度稀释,并以之作为模板,其灵敏性可达到5×10-1 pg,与实验室已建立的real-time PCR方法一致。人工污染实验中,对于LM接菌量为3 CFU/25 g的羊肉和生菜样品,增菌14 h即可通过建立的real-time RPA方法检出,与传统培养方法和real-time PCR检测结果均一致,但是前者所需时间明显少于后者。本文建立的LM real-time RPA方法特异性强,灵敏性高,操作简单,反应迅速,并能够摆脱对价格昂贵的荧光PCR仪和专业实验室的需求,可应用于食品突发事件中LM的现场快速检测,对保障我国食品安全具有重要意义。     

对“研究型教师”研究的反思

“研究型教师”是目前我国教育界讨论的热点问题之一，其研究内容主要涉及到什么是研究型教师、研究型教师的素质结构和怎样培养研究型教师等。研究存在的问题是，对研究型教师的要求过于理想化；研究型教师的角色定位不准；研究型教师的研究内容不明；培养策略过于泛化，未能体现出教师专业成长规律等。