兽医微生物学实验教学改革与探讨

介绍了兽医微生物学实验教学的改革,包括加强安全教育、优化实验教学内容、整合教学资源、改变教学模式、开放实验室等,从而达到增强实验教学效果,提高学生动手能力以及综合素质。     

Catesbeiania-1在毕赤酵母中的表达及其体外生物活性

目的在毕赤酵母中表达抗菌肽Catesbeiania-1,并检测其体外生物活性。方法将从牛蛙皮肤上新分离的一条抗菌肽基因Catesbeiania-1克隆至真核表达载体pPICZaA,构建重组真核表达质粒pPICZaA-Catesbeiania-1。在毕赤酵母GS115中表达重组Catesbeiania-1蛋白,并进行体外生物活性测定。结果所构建的重组表达质粒pPICZaA-Catesbeiania-1序列完整,经Tricine-SDS-PAGE分析,表达的重组Catesbeiania-1蛋白相对分子质量约为5800,分泌性蛋白的表达量为36.3mg/ml。重组蛋白对几种常见的革兰阳性菌和阴性菌均具有较好的抑菌活性,无胰蛋白酶水解活性和抑制剂活性,具有很强的抗氧化能力。结论已成功表达了抗菌肽Catesbeiania-1,表达的重组蛋白具有一定的抑菌活性。     

人溶菌酶基因的原核表达及其生物学活性

目的在大肠杆菌中表达人溶菌酶(hLYZ)基因,并检测其生物学活性。方法将人溶菌酶基因克隆至带有GST融合标签的原核表达载体pGEX-4T-1上,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达。表达产物经亲和层析纯化后,进行Western blot鉴定,并用溶壁微球菌比浊法检测酶活性,热激法检测其生物学活性。结果经PCR、双酶切鉴定和核苷酸序列测定,表明重组表达质粒pGEX-4T-hLYZ构建正确。SDS-PAGE显示,在相对分子质量约40000处可见目的蛋白条带,表达量占菌体总蛋白的46.5%,目的蛋白在裂解沉淀中占17.0%,在裂解上清中占58.3%,主要以可溶形式表达。纯化后,重组蛋白纯度可达95%以上,且具有良好的反应原性。重组hLYZ酶活性为2389U/mg,对金黄葡萄球菌和大肠杆菌具有抑制作用。结论已成功地在大肠杆菌中表达了可溶性重组人溶菌酶,且具有较高的生物学活性。     

牛蛙皮肤抗菌肽的分离纯化与活性测定

目的分离纯化牛蛙皮肤抗菌肽,并检测其活性。方法通过刺激与浸提的方法,得到牛蛙皮肤抗菌肽粗提物,测定其抑菌活性及最低抑菌浓度。利用SephadexG-50凝胶过滤和反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离纯化粗提物,用质谱仪测定多肽的相对分子质量及氨基酸序列,并进行活性检测。结果两种方法提取的牛蛙皮肤抗菌肽粗提物均具有较强的抑菌活性,纯化后的多肽相对分子质量约为4370,N-端含22个氨基酸,与其他两栖类来源的抗菌肽同源性较低。活性试验表明均无胰蛋白酶水解活性,存在一定的胰蛋白酶抑制剂活性,有轻微的溶血活性,不具有局部出血活性,具有抗凝和溶栓作用。结论已成功分离并纯化了1种新的牛蛙皮肤抗菌肽。     

宁夏电力科技教育工程院开展“爱心活动”、实施“平安工程”活动正式启动

4月17日，工程院全体职工举行“献我爱心，美化家园”资助仪式，标志着该院开展“爱心活动”、实施“平安工程”正式启动。     

新抗菌肽RGD-嵌合体靶向抗黑色素瘤活性

目的研究新抗菌肽RGD(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)嵌合体的靶向抗肿瘤活性。方法采用MTT法和流式细胞术筛选抗肿瘤活性强的抗肿瘤肽和细胞表面整合素αvβ3表达量高的肿瘤细胞,建立BALB/c裸鼠(B16)皮下肿瘤模型。将裸鼠随机分为T-La(FS)、RGD-T-La(FS)、T-La和RGD-T-La组,尾静脉注射对应药物(600μg/m L),100μL/只,并设阳性对照组(1 mg/mL顺铂溶液)和空白对照组(PBS)。检测抗肿瘤肽对黑色素瘤B16细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响。结果 RGD-T-La(FS)对B16细胞的敏感性最强,10μg/mL浓度时,细胞存活率为25. 12%;50μg/m L浓度时,T-La(FS)和RGDT-La(FS)作用的B16细胞存活率较低,分别为6. 61%和24. 65%。B16细胞表面整合素αvβ3表达量最高,PE-A荧光强度为868,其次为H460、HepG2和3T3细胞,PE-A荧光强度分别为840、446和265。T-La(FS)和RGD-T-La(FS)对VEGF的表达具有抑制作用,对Caspase-3的表达具有诱导作用,协同诱导黑色素瘤细胞的凋亡。结论为小分子抗菌肽作为靶向抗肿瘤肽的应用提供了科学依据,为临床上抗肿瘤药物的开发及应用奠定了理论基础。     

西北电网系统继电保护专业技术比武在银川落下帷幕

11月14日,"迎奥运、塑形象、添光彩"西北电网系统继电保护专业技术比武在银川落下帷幕。历时3天的技术比武在宁夏电力公司教育培训实训基地举行。     

新型牛蛙抗菌肽Temporin-La对金黄色葡萄球菌感染模型小鼠的治疗效果

目的探讨新型牛蛙抗菌肽Temporin-La对金黄色葡萄球菌感染模型小鼠的治疗效果。方法采用二倍稀释法检测抗菌肽Temporine-La对临床主要致病菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC);透射电镜观察Temporine-La对金黄色葡萄球菌的作用效果;复制金黄色葡萄球菌表皮感染小鼠模型,分别用4 U/ml青霉素和10μg/ml Temporin-La进行治疗,另设生理盐水对照组和空白对照组,感染后第4天,对各组小鼠进行白细胞计数、细菌计数、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达水平检测及病理组织切片观察。结果Temporin-La对革兰阳性菌的抑菌活性高于革兰阴性菌,其中对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强;透射电镜观察显示,经100μg/ml Temporin-La处理的金黄色葡萄球菌出现了质壁分离的现象,细胞壁缺失或发生裂解,金黄色葡萄球菌发生裂解而死亡;感染后第4天,青霉素组和Temporin-La组白细胞数及创面下肌肉组织细菌数均明显低于生理盐水对照组(P<0.05或P<0.01),Temporin-La组小鼠血清VEGF的表达水平明显高于青霉素组和空白对照组(P<0.05),青霉素组和Temporin-La组小鼠的创口修复情况明显优于生理盐水对照组。结论 Temporin-La具有抗小鼠金黄色葡萄球菌感染的效果,为其临床应用提供了实验依据,也为抗感染治疗提供了新的思路。     

牛蛙皮肤抗茵肽的分离纯化与活性测定

目的分离纯化牛蛙皮肤抗菌肽,并检测其活性。方法通过刺激与浸提的方法,得到牛蛙皮肤抗菌肽粗提物,测定其抑菌活性及最低抑菌浓度。利用SephadexG-50凝胶过滤和反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离纯化粗提物,用质谱仪测定多肽的相对分子质量及氨基酸序列,并进行活性检测。结果两种方法提取的牛蛙皮肤抗菌肽粗提物均具有较强的抑菌活性,纯化后的多肽相对分子质量约为4370,N-端含22个氨基酸,与其他两栖类来源的抗菌肽同源性较低。活性试验表明均无胰蛋白酶水解活性,存在一定的胰蛋白酶抑制剂活性,有轻微的溶血活性,不具有局部出血活性,具有抗凝和溶栓作用。结论已成功分离并纯化了1种新的牛蛙皮肤抗菌肽。     

细菌活的但非可培养（VBNC)状态研究进展

细菌“活的非可培养状态”（viable but non-culturable state ,VBNC）概念的提出对公共卫生学、微生物学、预防医学等传统学科产生了巨大冲击,大量研究结果证明很多细菌包括许多重要病原菌均可进入VBNC状态。处于VBNC状态的细菌在常规培养基上不生长,但在一定条件下可以复苏并保持毒力,实验表明部分病原菌处于VBNC状态仍具有致病性。本文对目前国内外关于VBNC状态细菌的研究进行了如下综述。