丙型肝炎病毒多表位基因核酸疫苗的构建及其免疫原性

目的构建丙型肝炎病毒(HCV)多表位基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-CtEm,用该重组质粒免疫BALB/c小鼠,并检测其免疫原性。方法用BamHⅠ和HindⅢ双酶切含有HCVC区、E2区模拟表位和NS3~NS5区细胞表位串联基因的原核表达载体pQE30-CtEm,克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),脂质体瞬时转染CHO细胞,并检测其表达。以100μg重组质粒免疫BALB/c小鼠,检测其体液免疫和细胞免疫效果。结果所构建的真核表达载体pcDNA3.1(-)-CtEm在CHO细胞中能获得有效表达。该质粒免疫小鼠后可诱导高水平的抗体,特异性淋巴细胞增殖反应、IFN-γ水平及CTL活性均明显高于空载体和生理盐水对照组。结论已成功构建HCV多表位基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-CtEm,免疫小鼠后可诱导特异性体液免疫和细胞免疫应答。     

建井期间巷道过含水层时注浆钻孔参数的确定

主要对巷道过含水层或接近含水层时,注浆封堵过程中从扩散半径和孔口管两方面验证了探水钻孔设计参数。     

徐州李堂煤矿首采工作面沉积环境分析

通过对李堂煤矿3C101首采工作面的胶带顺槽和轨道顺槽的煤层揭露情况、采用钻探手段取得的资料及区域各类地质资料,得出轨道顺槽煤层厚度变化的原因是河流冲刷所致.从河流的整体流向及可能的冲刷区域确定皮带顺槽的未来施工方式及下个工作面的布置情况.     

HCV复合多表位基因真核表达载体的构建及在真核细胞中的表达

目的建立丙型肝炎病毒(HCV)复合多表位基因的真核表达载体,并在COS7细胞中瞬时表达。方法用PCR方法扩增核心区羧基端部分缺失的基因片段;分别合成HCV E2区模拟表位和NS3~NS57个T或Th细胞表位基因;PCR方法将羧基端部分缺失的HCV核心区基因与合成的表位基因串联,克隆入真核表达载体pcDNA3·1(-),并通过脂质体瞬时转染COS7细胞。结果所构建的真核表达载体pcDNA3·1(-)-CtEm已成功转染COS7,间接免疫荧光和RT-PCR证实,pcDNA3·1(-)-CtEm可在COS7中表达复合多表位基因。结论已成功构建HCV复合多表位基因的真核表达载体,并在COS7细胞中瞬时表达,为进一步复合多表位的基因免疫奠定基础。     

国产与进口HBsAg ELISA试剂盒的质量比较

目的比较国产与进口HBsAg ELISA试剂盒的质量。方法将卫生部临床检验中心HBsAg临床科研血清盘样本60份及随机抽取的某市无偿献血者血清样本200份,用国产及进口ELISA试剂进行双盲法筛检;以卫生部临床检验中心血清盘及献血者HBsAg阳性并经中和试验证实者为金标准,用四格表法计算比较真实性及可靠性指标,并对截断点的合理性进行评价。结果国产与进口ELISA试剂的灵敏度分别为86%和100%;特异度分别为100%和96%;尤登指数分别为0·86和0·96;两种试剂的重复符合率均为100%;国产英科新创规定的截断点较合理,进口试剂盒截断点规定值偏小。结论试剂的灵敏度以进口试剂盒较好,但特异度比国产试剂差,两种试剂的重复性均好。两种试剂联合筛检可保证输血的安全性。     

浅谈沿空掘巷等特殊条件下超前探放老空积水的方法

为了确保矿井老空积水下采掘工作面掘进和回采工作的顺利开展,需要超前对老空积水进行探测和疏放,但由于矿井采用沿空掘巷的方式布置工作面,老空区积水位置的巷道高程与沿空掘巷的高程基本悬殊不大,这样就给选择超前探放地点带来一定的难度,如果所选位置高程高于老空积水高程,则无法达到疏放目的;如果选择高程低于老空积水位置,超前探放距离不符合规程规定,所以在沿空掘巷留设6 m护巷煤柱的情况下,给疏放老空积水工作带来很大的被动。结合李堂煤矿以往的探放老空积水的经验,探索出了特殊条件下超前探放老空积水的方法。     

乙肝病毒前S1基因与截短C基因穿梭表达载体构建

目的构建HBV前S1基因和截短C基因分泌型大肠杆菌和分枝杆菌穿梭质粒。方法以含HBV基因组质粒pCP10序列为模板,PCR扩增前S1基因和C基因截短片段,依次克隆至分泌型穿梭表达载体pDE22,电穿孔转化法将重组质粒导入耻垢分枝杆菌,经潮霉素抗性筛选及PCR鉴定,阳性克隆热休克诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析。结果扩增到了预期长度的2个目的基因,构建了分泌型穿梭载体,SDS-PAGE分析可见相对分子质量约23000蛋白表达条带。结论已成功构建耻垢分枝杆菌分泌表达前S1基因和截短C基因的穿梭载体,为研究含前S基因和截短C基因的重组BCG疫苗奠定了基础。     

留庄矿16203工作面上材料道出水因素分析

留庄煤矿16203工作面上材料道,在越过F逆2断层裂隙发育地段出现局部涌水量突然增大,出水机理较为复杂。就该区域内的充水水源和构造地质条件进行了综合分析,确定了16203工作面出水水源。为16202工作面及17101工作面的开采布局及防治水方案的确定提供了参考依据。     

留庄煤矿16煤底板带压开采的安全性论证

根据留庄煤矿的生产现状并综合相邻水文地质条件相似开采矿井的生产资料,对本矿井实施了补充水文地质勘探,利用钻探和物探相结合,通过钻探工作初步掌握了16煤底板岩性和含水层富水性资料。利用16煤底板至奥灰隔水层厚度与突水系数的关系,综合计算推理,对16煤带压开采的安全性进行了分析论证。