复方戒毒肽和激光对自愿戒毒者血清中一氧化氮、一氧化氮合酶和乙酰胆碱酯酶的影响

目的 观察复方戒毒肽和激光对自愿戒毒者血清中一氧化氮、一氧化氮合酶(nitric oxide synthetase，NOS)和乙酰胆碱酯酶(AChE)的影响，探讨复方戒毒肽和激光戒毒的机制。方法：30例自愿戒毒者随机分成3组，每组10例。Ⅰ组为单独服用复方戒毒肽组；Ⅱ组为激光治疗组；Ⅲ组为复方戒毒肽加激光治疗组。治疗前和治疗10d后测定血中一氧化氮、NOS和AChE的水平，用生化方法分析。结果：各组血中一氧化氮浓度治疗前后比较差异无显著性意义(P&;gt;0．05)。Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ组治疗后血中NOS活性分别是(13．34&;#177;5．50)（17．34&;#177;3．17)，（18．34&;#177;1．83)nkat／L，比治疗前（35．84&;#177;5．00)，(36．17&;#177;9．17)，(28．67&;#177;10．17)nkat／L明显下降，差异有显著性意义。Ⅰ，Ⅲ组血中AchE浓度治疗后分别是(23．17&;#177;2．67)，(28．59&;#177;3．63)mmol／L，与治疗前（15．00&;#177;5．62)，（15．63&;#177;6．41)mmol／L比显著增高，而Ⅱ组治疗前后比较差异无显著性意义(P&;gt;0．05)。结论：复方戒毒肽能降低患者血中NOS的含量和升高AChE的水平，激光能升高血中NOS的水平。     

复方戒毒肽和激光对自愿戒毒者能量代谢的影响

目的：探讨复方戒毒肽和激光对自愿戒毒者能量代谢的影响。方法：30例自愿戒毒者被分成3组，分别是复方戒毒肽组、激光组、复方戒毒肽加激光组，每组10例。治疗前和治疗10d后分别抽血。血中乳酸，乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)和Na^+-K^+-ATP酶的含量用生化方法分析。结果：复方戒毒肽加激光组血清中乳酸的浓度治疗前后分别是(2．75&;#177;0．28)，(3．04&;#177;0．36)mmol／g，差异有显著性意义(t=0．041．P&;lt;0．05)。3组血清中LDH的浓度治疗前分别是(1290．00&;#177;384．27)，(1410．00&;#177;443．35)，(980．00&;#177;285．97)U／L；治疗后分别为(2546．67&;#177;563．76)．(1960．00&;#177;514．67)，(1640．00&;#177;474．15)U／L,治疗前后比较，差异有显著性意义(t=0．00l，0．038，0．004，P&;lt;0．01～0．05)。3组全血中Na^+-K^+-ATP酶的浓度治疗后与治疗前比较，差异均无显著性意义(P&;gt;0．05)。结论：复方戒毒肽和激光治疗后均能增加志愿戒毒者血中LDH的含量。     

酸性肽对大鼠星形胶质细胞分泌神经生长因子和脑源性神经因子水平的影响

背景:神经生长因子和脑源性神经因子对神经细胞的存活和增殖非常重要。阿尔茨海默病患者的神经生长因子和脑源性神经因子水平均较低。目的:探讨酸性肽能否增加大鼠星形胶质细胞分泌神经生长因子和脑源性神经因子。设计:随机对照动物实验。单位:郑州大学医学院生物化学与分子生物学教研室。材料:实验于2003-09/2005-05在郑州大学生物活性肽研究所第一实验室和郑州大学基础医学院细胞培养中心完成。选取出生后2d内的SD乳鼠15只作为实验对象。方法:①将SD乳鼠在无菌条件下断头取出大脑皮质部分,进行星形胶质细胞的纯化培养,采用胶质纤维酸性蛋白免疫组化方法鉴定星形胶质细胞。②将培养的星形胶质细胞随机分为6组:空白对照组、血清对照组、阳性对照组、酸性肽37.5,75,150mg/L治疗组。空白对照组不施加任何实验因素,血清对照组加入体积分数为0.2的血清,阳性对照组加入1000U/mL干扰素,酸性肽治疗组则分别加入37.5,75,150mg/L的酸性肽。③将长满瓶底的第2代星形胶质细胞消化成单细胞悬液,以5×105mL等量接种于3块12孔培养板中。各组均于培养24,48,72h各时间点测定细胞存活率、细胞上清液中和细胞内神经生长因子及脑源性神经因子含量。主要观察指标:①不同培养时间各组细胞计数和存活率的检测结果。②酸性肽对大鼠星形胶质细胞增殖的影响。③不同培养时间各组星形胶质细胞上清液中神经生长因子及脑源性神经因子含量的变化。结果:①与空白对照组比较,酸性肽75,150mg/L治疗组细胞计数和细胞存活率在培养24,48,72h时均明显增加(P<0.05,0.01,0.001);酸性肽37.5mg/L治疗组虽有所增加但不明显。②与空白对照组比较,酸性肽37.5,75,150mg/L治疗组细胞增殖率均显著升高(0,17.5%,45.5%,72.5%,P<0.001)。③与空白对照组比较,酸性肽37.5,75,150mg/L治疗组细胞上清液中神经生长因子的吸光度值在培养24,48,72h时均明显增加(P<0.001);除了在培养24h时间点酸性肽37.5mg/L治疗组不能增加星形胶质细胞分泌脑源性神经因子外,其他各浓度酸性肽治疗组在培养24,48,72h时脑源性神经因子的吸光度值均显著提高(P<0.05,0.001)。结论:酸性肽能够不同程度地增加大鼠星形胶质细胞分泌神经生长因子和脑源性神经因子。     

小鼠SK2基因亚克隆的构建和鉴定

背景:小电导Ca2+激活钾(small conductance Ca2+-activated potassium channels,SK channels)通道存在于大多数可兴奋性细胞并存动作电位的复极化中发挥着重要作用.但SK通道与Ca2+及其他分子的偶合及调控途径尚未明确.目的:为观察SK2通道基因区段与Ca2+及其他分子的偶合及调控,构建pGBAT7和SK2基因片段重组子.方法:根据SK2基因的全长序列,设计3个SK2基因片段引物,经PCR扩增,测序鉴别后,分别亚克隆到酵母表达质粒pGBKT7.构建的pGBKT7-SK2亚克隆通过电转染法分别转染到酵母AH109菌中并被激活.pGBKT7-SK2亚克隆从酵母AH109菌中提取,电泳和测序鉴定.结果与结论:SK2目的基因PCR扩增产物分别为411,546,729 bp.成功构建了3个含有411,546,729 bp的pGBKT7-SK2亚克隆,电泳和测序鉴别表明构建的pGBKT7-SK2亚克隆完全符合设计要求.转染到酵母AH109菌中pGBKT7-SK2亚克隆可被激活,为探讨SK2通道与其他分子的功能相关提供了重要的物质基础.     

酸性肽对阿尔茨海默病大鼠脑内一氧化氮、一氧化氮合酶和乙酰胆碱酯酶水平的干预

背景：有实验指出酸性肽可能是通过抑制一氧化氮等毒性化合物的生成而提高阿尔茨海默病模型大鼠的学习记忆能力。目的：建立阿尔茨海默病动物模型，观察给予不同剂量浓度的酸性肽治疗后大鼠脑一氧化氮、一氧化氮合酶与乙酰胆碱酯酶含量的变化。设计：随机对照单一实验。单位：郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室。材料：实验于2003-02／07在郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室的第二研究室和实验动物房完成。选取雄性SD大鼠100只，用跳台实验除去反应迟钝的动物，共84只大鼠纳入实验，随机分为7组：正常对照组，模型组，生理盐水组，吡拉西坦治疗组，酸性肽15，30，60mg／kg治疗组，12只／组。酸性肽为本课题组从牛脑中分离出的一个新的小分子肽，由三个谷氨酸连成的三肽。方法：除正常对照组外，其余各组大鼠常规饲养1周后，均采用大鼠脑组织立体定位微量注射技术，脑海马注射5μg鹅膏蕈氨酸，以损毁大鼠双侧迈纳特基底核建立阿尔茨海默病模型。正常对照组和模型组不给药，生理盐水组用生理盐水灌胃，吡拉西坦治疗组用0.3g/kg吡拉西坦灌胃，酸性肽15，30，60mg／kg治疗组分别用15，30，60mg／kg酸性肽灌胃，连续20d，1次／d，2mL／次。灌胃期满将大鼠麻醉后断头处死，立即在冰盘中开颅取脑制备组织匀浆。4℃下1000r／min离心10min，取上清液用一氧化氮、一氧化氮合酶和乙酰胆碱酯酶检测试剂盒测定一氧化氮、一氧化氮合酶和乙酰胆碱酯酶的含量。主要观测指标：各组大鼠脑内一氧化氮、一氧化氮合酶和乙酰胆碱酯酶的含量。结果：纳入实验的84只大鼠全部进入结果分析。各组大鼠脑内一氧化氮、一氧化氮合酶和乙酰胆碱酯酶含量的比较：与模型组比较，酸性肽15，30，60mg／kg治疗组一氧化氮含量均明显降低[（1．95&;#177;O．20），（1．39&;#177;0．10），（1．25&;#177;0．07），（1．00&;#177;0．04）mmoL／kg，P〈0．05]；一氧化氮合酶含量均明显降低[（4．53&;#177;0．18），（3．39&;#177;0．09），（3．10&;#177;0．06），（2．97&;#177;0．06）μmol／kg，P〈0．05]；乙酰胆碱酯酶含量无明显变化[（0．67&;#177;0．12），（0．71&;#177;0．11），（0．72&;#177;0．08），（0．72&;#177;0．07）mmol/L，P〉0．05]。结论：酸性肽能够显著降低阿尔茨海默病模型大鼠脑内一氧化氮、一氧化氮合酶的生成，而对乙酰胆碱酯酶的活性并无明显影响。提示酸性肽可能是通过抑制一氧化氮等毒性化合物的生成或毒性作用来提高阿尔茨海默病模型大鼠的学习记忆能力。     

复方戒毒肽对吗啡成瘾小鼠脑内N-甲基-D-天门冬氨酸受体1和一氧化氮合酶表达水平的影响

目的:观察复方戒毒肽对吗啡成瘾小鼠脑内N-甲基-D-天门冬氨酸受体1和一氧化氮合酶水平的影响。方法:实验于2003-03/2004-05在郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室动物室和郑州大学志愿戒毒研究中心第一实验室完成。复方戒毒肽由脑肽配制而成熏主要含有酸性肽,牛神经肽FF等小分子神经肽。80只健康的昆明种小鼠,雌雄各半,8～10周龄,体质量(20±2)g。抽签随机分为8组,每组10只。正常对照组:不做任何处理。成瘾模型建立:腹腔注射吗啡,1次/d熏100mg/kg,共11d。成瘾模型组:成瘾模型建立后,不做任何处理。生理盐水组:成瘾模型建立后,用生理盐水1mL/次灌胃治疗15d。自然戒断组:成瘾模型建立后,正常喂养15d,期间不做任何处理;高、中、低剂量的复方戒毒肽治疗组:成瘾模型建立后,给成瘾小鼠按80mg/kg,40mg/kg,20mg/kg的复方戒毒肽进行灌胃治疗,神经肽溶液的实际用量为1mL熏0.5mL熏0.25mL,时间为15d。单独使用复方戒毒肽组:仅给正常小鼠按80mg/kg剂量的复方戒毒肽灌胃15d。实验结束后取材,通过免疫组化和Biosens数字成像系统分析仪测定海马内N-甲基-D-天门冬氨酸受体1和一氧化氮合酶水平。结果:80只小鼠均进入结果分析。各组N-甲基-D-天门冬氨酸受体1和一氧化氮合酶的水平的比较:与正常对照组相比,成瘾模型组两者水平均增高(134.93±6.83,117.24±3.91;116.26±8.64,96.81±6.16,P<0.05);与成瘾模型组、自然戒断组、生理盐水组、40mg/kg和20mg/kg复方戒毒肽组相比,80mg/kg复方戒毒肽组两者水平均明显降低(134.93±6.83,117.24±3.91;133.10±8.97,115.82±5.61;134.92±8.51,116.55±5.10;120.02±7.49,106.03±8.99;120.02±7.49,106.03±8.99;128.59±9.26,112.59±2.93;130.50±2.50,113.22±5.14,P<0.05)。结论:80mg/kg的复方戒毒肽能够降低吗啡成瘾小鼠脑内N-甲基-D-天门冬氨酸受体1和一氧化氮合酶的水平。     

酸性肽对血管性痴呆模型小鼠的治疗效应

背景应用酸性肽对血管型痴呆(vascular dementia,VD)小鼠模型进行治疗研究,是否可以发现酸性肽的治疗效果.目的研究酸性肽对血管型模型痴呆小鼠学习记忆能力和它们脑中蛋白质和一氧化氮含量的变化并与正常小鼠相比较.设计随机对照的实验研究.单位郑州大学医学院生物化学与分子生物学教研室.对象实验于2002-10/2003-02在郑州大学医学院生物化学与分子生物学教研室的第一研究室和动物房进行.取昆明种小鼠84只,跳台实验低于正常小鼠平均反应时间的1只动物被排除.随机分为7组正常组,模型组,盐水组,脑复康组,酸生肽高浓度组,酸性肽中浓度组,酸性肽低浓度组.方法除12只正常组小鼠外,其余的动物一直用高脂乳剂0 5 mL/d灌胃共10 d,按照高维娟等的方法建立VD动物模型.模型组不作任何治疗,盐水组用生理盐,脑复康组应用脑复康,酸性肽高、中、低组应用不同浓度酸性肽治疗,口服给药治疗15 d.之后用跳台试验进行学习记忆功能的变化测试,随后处死小鼠,测定脑中蛋白质和一氧化氮水平.主要观察指标各组小鼠学习记忆功能和脑中蛋白质和一氧化氮水平.结果①跳台试验的结果表明酸性肽能明显地减少痴呆小鼠跳台试验的错误次数,能显著地增加痴呆小鼠的学习记忆能力.②生化分析结果表明,模型组小鼠因脑缺血而使脑中蛋白质的含量[3.530 9±0.327 8)g/L]较正常组[4.028 3±0.378 3)g/L]减少.用酸性肽治疗痴呆小鼠后,其脑中的蛋白质含量[高、中、低浓度组分别为(4.908 3±0.515 3),(4.752 5±0 471 7),(4.376 7±0.370 7)g/L]比模型组和生理盐水治疗组均显著增加.说明酸性肽能促进脑内蛋白合成.这有利于受损脑细胞的修复和功能恢复.③酸性肽可显著地抑制NO的合成.这将会减少一氧化氮对脑细胞的毒性作用.结论酸性肽能显著增强VD小鼠的学习记忆能力,有利于受损脑细胞的修复和功能恢复.     

复方戒毒肽和激光对自愿戒毒者血清中一氧化氮、一氧化氮合酶和乙酰胆碱酯酶的影响

目的观察复方戒毒肽和激光对自愿戒毒者血清中一氧化氮、一氧化氮合酶(nitricoxidesynthetase,NOS)和乙酰胆碱酯酶(AChE)的影响,探讨复方戒毒肽和激光戒毒的机制。方法:30例自愿戒毒者随机分成3组,每组10例。Ⅰ组为单独服用复方戒毒肽组;Ⅱ组为激光治疗组;Ⅲ组为复方戒毒肽加激光治疗组。治疗前和治疗10d后测定血中一氧化氮、NOS和AChE的水平,用生化方法分析。结果:各组血中一氧化氮浓度治疗前后比较差异无显著性意义(P>0.05)。Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ组治疗后血中NOS活性分别是(13.34±5.50)(17.34±3.17),(18.34±1.83)nkat/L,比治疗前(35.84±5.00),(36.17±9.17),(28.67±10.17)nkat/L明显下降,差异有显著性意义。Ⅰ,Ⅲ组血中AchE浓度治疗后分别是(23.17±2.67),(28.59±3.63)mmol/L,与治疗前(15.00±5.62),(15.63±6.41)mmol/L比显著增高,而Ⅱ组治疗前后比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论:复方戒毒肽能降低患者血中NOS的含量和升高AChE的水平,激光能升高血中NOS的水平。     

复方戒毒肽和激光对自愿戒毒者能量代谢的影响

目的探讨复方戒毒肽和激光对自愿戒毒者能量代谢的影响. 方法 30例自愿戒毒者被分成 3组,分别是复方戒毒肽组、激光组、复方戒毒肽加激光组,每组 10例.治疗前和治疗 10 d后分别抽血.血中乳酸,乳酸脱氢酶( lactate dehydrogenase,LDH)和 Na+-K+-ATP酶的含量用生化方法分析. 结果复方戒毒肽加激光组血清中乳酸的浓度治疗前后分别是( 2.75± 0.28),( 3.04± 0.36) mmol/g,差异有显著性意义( t=0.041,P< 0.05). 3组血清中 LDH的浓度治疗前分别是( 1290.00± 384.27),( 1410.00± 443.35),( 980.00± 285.97)U/L;治疗后分别为( 2546.67± 563.76),( 1960.00± 514.67),( 1640.00± 474.15) U/L,治疗前后比较,差异有显著性意义( t=0.001,0.038,0.004,P< 0.01～ 0.05). 3组全血中 Na+-K+-ATP酶的浓度治疗后与治疗前比较,差异均无显著性意义( P >0.05). 结论复方戒毒肽和激光治疗后均能增加志愿戒毒者血中 LDH的含量.     

酸性肽对阿尔茨海默病模型大鼠脑内N-甲基-D-天冬氨酸受体、神经生长因子和β淀粉样蛋白水平的调节作用

背景:一些研究已经证实酸性肽对痴呆模型大鼠有良好的治疗作用,但其发挥作用的途径尚需探讨。目的:观察酸性肽能否抑制阿尔茨海默病大鼠脑内N-甲基-D-天冬氨酸受体和淀粉样β蛋白的产生以及促进神经生长因子的产生和分泌。设计:随机对照动物实验。单位:郑州大学医学院生物化学与分子生物学教研室。材料:实验于2005-03/2006-05在郑州大学生物活性肽研究所第一实验室和郑州大学基础医学院细胞培养中心完成。选取10周龄的健康且经Y-迷宫测定无痴呆症状的雄性SD大鼠70只,单纯随机分为7组,正常对照组、模型组、生理盐水组、谷氨酸0.3g/kg组、酸性肽15,30,60mg/kg组,每组10只。方法:正常对照组不干预,其他6组用鹅膏蕈氨酸损毁大鼠双侧迈内特基底核,建立阿尔茨海默病病的动物模型,造模后谷氨酸0.3g/kg组灌胃谷氨酸0.3g/kg,酸性肽15,30,60mg/kg组灌胃相应剂量酸性肽(自制),生理盐水组灌胃等量生理盐水,1次/d,2mL/次,连续20d。主要观察指标:①灌胃期满后各组大鼠即做Y-迷宫实验以检测大鼠的学习记忆能力,以正确反应次数为指标。②学习记忆测试结束后,各组大鼠断头取脑,免疫组化染色,再用BiosensDigitalImagingSystem灰度扫描仪扫描以检测大鼠脑内神经生长因子、N-甲基-D-天冬氨酸受体、淀粉样β蛋白的水平。结果:70只大鼠全部进入结果分析。①Y-迷宫实验中正确反应次数:其他6组均低于正常组(P<0.01);酸性肽30,60mg/kg组高于模型组、生理盐水组、谷氨酸0.3g/kg组及酸性肽15mg/kg组(P<0.01)。②基底前脑神经生长因子灰度值:模型组、生理盐水组、谷氨酸0.3g/kg组及酸性肽15mg/kg组低于正常对照组(69.60±2.41,69.62±1.46,69.62±1.46,69.73±1.87,80.77±2.72,P<0.01),酸性肽30,60mg/kg组与正常对照组比较差异不显著(79.39±2.23,80.20±1.7,P>0.05),但高于其他几组。③大脑皮质N-甲基-D-天冬氨酸受体和淀粉样β蛋白表达的灰度值:模型组、生理盐水组、谷氨酸0.3g/kg组及酸性肽15mg/kg组高于正常对照组(N-甲基-D-天冬氨酸受体:81.01±1.38,81.31±2.06,81.37±1.39,79.38±1.23,69.50±1.04;淀粉样β蛋白:74.26±1.39,74.89±8.66,74.88±1.46,74.16±2.48,67.40±3.06,P<0.01),酸性肽30,60mg/kg组与正常对照组比较差异不显著(N-甲基-D-天冬氨酸受体:70.55±2.89,69.78±1.24;淀粉样β蛋白:67.66±2.25,67.58±2.21,P>0.05),但低于其他几组。结论:30,60mg/kg的酸性肽能明显改善阿尔茨海默病模型大鼠的学习记忆能力,其治疗作用途径可能是通过上调基底前脑中的神经生长因子水平,下调大脑皮质中N-甲基-D-天冬氨酸受体和β淀粉样蛋白的水平实现的。