吐温修饰脂肪酶的研究

分别用甲醛和戊二醛作为偶联剂,共价连接吐温80和猪胰脂肪酶,回收共价修饰脂肪酶,并且比较修饰酶与自然酶在性质上的差异。当甲醛和戊二醛浓度相同时,用甲醛连接的修饰酶的活力最高,而用戊二醛连接的修饰酶的氨基连接效率高。当用不同浓度的甲醛修饰时,发现浓度为1．25mg·mL的甲醛连接的修饰酶的活力最高。在碱性条件下,修饰酶比自然酶的活力高,在中性、酸性条件下,自然酶的活力高     

苯甲酸人工抗原的合成与免疫效价的测定

通过苯甲酸的衍生物邻苯二甲酸酐(PA)的氨解法将苯甲酸(BA)偶联到载体蛋白上合成苯甲酸的人工抗原:免疫原苯甲酸-鸡卵清蛋白(BA-OVA)和包被原苯甲酸-牛血清白蛋白(BA-BSA).通过紫外光谱扫描、红外光谱扫描及SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法检测鉴定人工抗原,并用免疫原(BA-OVA)免疫BALB/c小鼠,检测抗体的生成.结果表明,苯甲酸人工抗原的合成成功.根据邻苯二甲酸酐、人工抗原和载体蛋白的紫外吸收值,计算出免疫原中苯甲酸(BA)与载体鸡卵清蛋白(OVA)的偶联比约为174:1.免疫小鼠血清中的抗体通过ELISA法检测为阳性(血清效价达到了1:3.2×10<'5>),表明合成的抗原已诱导出针对苯甲酸的特异性抗体生成,为进一步的苯甲酸单克隆抗体制各和免疫检测提供可靠的免疫原.     

大肠杆菌丙酮酸脱氢酶的克隆与表达优化

为了在大肠杆菌中表达大肠杆菌丙酮酸脱氢酶,用PCR法从大肠杆菌总DNA中克隆了pdc基因,将其插入载体pGEX-KG后转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下实现了表达.通过对表达条件的优化,在TB M9(1∶1)培养基中,33℃下使用终浓度0.5 g·L-1的乳糖诱导4 h,重组大肠杆菌丙酮酸脱氢酶的表达量可占全菌蛋白的45%左右,比未优化前提高了约20%,同时大大降低了成本.     

久效磷人工抗原的制备、鉴定与免疫效价的测定

以戊二醛为交联剂制备了久效磷(Mcp)人工抗原(Mcp-OVA)和包被抗原(Mcp-BSA),采用紫外吸收光谱和SDS-PAGE对人工抗原进行了鉴定.取人工抗原免疫BALB/c小鼠,并采用ELISA法对小鼠抗血清效价进行了检测.结果表明,人工抗原中Mcp与OVA的偶联比为23.3:1,Mcp-OVA的最适包被浓度为1.5 μg·mL-1,3次免疫后小鼠的抗血清效价均达到1:2×105以上.     

胸腺基质淋巴细胞生成素基因的克隆及表达条件的优化

将BamHI和EcoRI酶切过的胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)基因片段插入载体pET28a,然后转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下实现了TSLP基因在大肠杆菌中的表达.对表达条件进行了优化,在TB+M9(1∶1)培养基中,37℃下使用终浓度0.4 mmol·L-1的IPTG诱导3 h,重组TSLP的表达量可占全菌蛋白的18.6%左右,比优化前提高了约15%.     

邻苯二甲酸二乙基己酯对金鲫鱼脑组织和肾脏的氧化损伤作用

研究了邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)对金鲫鱼脑组织和肾脏的氧化损伤程度及其发生机制.结果表明,DEHP会造成金鲫鱼脑组织和肾脏的氧化损伤,随着DEHP浓度的升高,超氧化物歧化酶活力先升高后降低,丙二醛含量不断上升,呈明显的剂量一效应关系.     

丙酮酸脱氢酶测活方法比较研究

对目前几种丙酮酸脱氢酶测活的方法进行了比较研究.结果表明,在测定丙酮酸脱氢酶活性时, 2,6-二氯吲哚酚法灵敏度较高,是一种经济有效的好方法,铁氰化钾法不论从反应时间和现象变化上看都是最差的.但2,6-二氯吲哚酚法不能用于测定丙酮酸脱氢酶复合体活性,这时用辅酶A法较好,其灵敏度也比较高.     

甲醛在体外对HEK293细胞Rab26基因复制的影响

以HEK293细胞为材料,经不同浓度的甲醛(≥250 μmol·L-1)染毒后,检测其DPC的含量,同时对染毒后HEK293基因组中的Rab26基因进行PCR扩增.结果表明:随着甲醛浓度的升高,DPC的含量显著升高;Rab26基因的扩增量随甲醛浓度的升高、DPC含量的升高而降低.说明高浓度甲醛能够诱导DPC产生,同时说明Rab26基因形成了DPC,因此,扩增量下调.     

邻苯二甲酸二-(2-乙基己基)酯对小鼠红细胞ATPase活性的影响

为了研究邻苯二甲酸二-(2-乙基己基)酯(DEHP)对小鼠红细胞ATPase活性的影响,用不同浓度的DEHP对昆明小鼠进行腹腔注射染毒.2周后,各染毒组红细胞Na -K -ATPase活力与对照组相比均明显下降(P＜0.01),并具有很好的剂量-效应关系(R=-0.942,P＜0.01).125 mg·kg-1染毒组红细胞Ca2 -ATPase活力略有下降,但无显著性差异(P＞0.05),随着染毒浓度的倍增,红细胞Ca2 -ATPase活力不断下降,与对照组相比表现出极显著性差异(P＜0.01),同时也具有很好的剂量-效应关系(R=-0.968,P＜0.01 ).结果表明,DEHP抑制了红细胞ATPase的活性,证明DEHP对红细胞造成了损伤,对机体具有明显的毒性作用.