表达鼠源β-防御素14的植物乳植杆菌减轻小鼠急性结肠炎

抗菌肽β-防御素除抗菌活性以外,还具有免疫调节功能,在维持肠道稳态中发挥重要作用。本研究旨在探讨鼠源β-防御素14（mouse β-defensin 14,mBD14）在炎症性肠病（inflammatory bowel disease,IBD）中的作用。本实验采用植物乳植杆菌为载体,利用基因工程技术实现mBD14在小鼠肠道中的靶向递送,同时评估其对葡聚糖硫酸钠盐（dextran sulfate sodium,DSS）诱发的小鼠结肠炎的调控作用。结果显示,表达mBD14的植物乳植杆菌能够缓解小鼠急性结肠炎症状。基于表观指标的明显变化,进一步探究表达mBD14的植物乳植杆菌在结肠炎中的作用机制,发现该菌株可调节肠道菌群,进而缓解上皮损伤,维持肠道屏障,同时抑制结肠内促炎因子的分泌,并阻断NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3炎症小体以及下游炎症通路的激活。综上所述,表达mBD14的植物乳植杆菌可通过维持肠道稳态来减轻DSS诱导的小鼠急性结肠炎,本研究可为通过益生菌和抗菌肽防治IBD提供新思路。     

阿克曼氏菌缓解胰腺炎所致肠道损伤的研究

目的:探究阿克曼氏菌在小鼠重症急性胰腺炎中的作用及机制。方法:将C57BL/6J雄性小鼠随机分成对照组、模型组、活菌和灭活菌组。通过腹腔注射雨蛙素及脂多糖建立小鼠重症急性胰腺炎模型,造模前10 d每天灌胃给予活菌组小鼠200 μL 5×109 CFU/mL阿克曼氏菌活菌制剂,灭活菌组灌胃等量灭活菌制剂。检测肠道通透性及肠道紧密连接蛋白的表达情况及组织学变化。称量胰腺干、湿重,检测血清淀粉酶、脂肪酶活力、胰腺病理学变化,胰腺组织中细胞因子表达及胰腺中核转录因子- κB(NF-κB)的蛋白表达。结果:活菌组与灭活菌组小鼠较模型组小鼠相比,肠紧密连接蛋白表达增加,杯状细胞及黏液层增多。其中,活菌对肠机械屏障的保护作用更为显著。胰腺水肿缓解不明显,未能降低血清淀粉酶及脂肪酶活力,对促炎性细胞因子及炎症信号NF-κB的磷酸化调控能力不足。结论:阿克曼氏菌活菌及灭活菌预处理可以保护重症急性胰腺炎引起的肠道屏障损伤,然而,无法减轻小鼠的重症急性胰腺炎。     

一种基于BALB/c背景由膳食麸质引起的乳糜泻小鼠模型的构建及其评价

目的：利用麸质诱导建立小鼠乳糜泻（celiac disease,CeD）模型,通过检测乳糜泻相关指标来评价该模型的可行性。方法：将连续食用无麸质饲料3 代以上的雌性BALB/c小鼠（6～8 周龄）随机分为两组（对照组（Control组）和模型组（CeD组））,CeD组于实验开始的第1天将饲料换为麸质含量2.5 g/kg的含麸质饲料,Control组则继续饲喂无麸质饲料。实验前3 周,分别给予CeD组每只小鼠腹腔注射含150 μg麦醇溶蛋白的磷酸盐缓冲溶液（0.2 mL 0.01 mol/L）,每周两次。在实验的第4周,给予CeD组每只小鼠后脚掌注射乳化有50 μg麦醇溶蛋白的弗氏完全佐剂50 μL两次（第1天和第4天各注射一次）。利用血清荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖质量浓度表征小鼠的肠道通透性;利用实时荧光定量聚合酶链式反应检测小鼠十二指肠组织中紧密连接蛋白（ZO-1、ZO-2、Claudin-1等）、相关炎症因子白细胞介素（（interleukin,IL）-15、干扰素（interferon,IFN）γ和IL-4等）和相关免疫细胞的表面标志物基因（CD4、CD19、CD138等）的表达水平;采用酶联免疫吸附试验测定小鼠十二指肠中组织转谷氨酰胺酶（tissue transglutaminase,tTG）和连接蛋白水平。结果：相比Control组,CeD组小鼠十二指肠肠道屏障被明显破坏,小肠绒毛长度明显缩短,TGM2 mRNA相对表达量显著升高（P＜0.05）,与乳糜泻相关的炎症因子和免疫细胞的标志物基因相对表达量都显著升高。结论：该造模方法在肠道病理情况、肠道屏障以及免疫方面均能很好地模拟临床上乳糜泻的病理学特征,可用于未来乳糜泻新的潜在治疗措施研究中。