灭活菌体型后生元的体外降血压、降尿酸及降血糖作用

后生元对人体具有多种健康助益,是近年来研究的热点。某市售后生元是以大豆分离蛋白为主要原料开发制备的灭活菌体型后生元产品,该种原料类型的后生元产品鲜有报道。为了解其生物活性,研究采用大鼠胸大动脉平滑肌细胞（VSMC）、人肾小管上皮细胞（HK-2）、小鼠前脂肪细胞（3T3-L1）模型评价其体外降血压、降尿酸、降血糖作用。结果显示,该后生元产品能够显著抑制血管紧张素-Ⅱ（AngiotensinⅡ,AngⅡ）导致的VSMC细胞迁移及氧化应激,且具有浓度依赖性,作用质量浓度为200μg/m L时,迁移率降低12.44%,活性氧（ReactiveOxygen,ROS）释放量仅为空白组的86.51%。在HK-2细胞模型中,后生元能极显著降低HK-2细胞的尿酸含量,700μg/m L作用下,尿酸含量降低30.02%。而在降糖活性评价中,后生元无法促进胰岛素抵抗（Insulin Resistance,IR）的3T3-L1细胞吸收葡萄糖。研究结果表明,后生元具有显著的降血压、降尿酸生物活性,这为开发兼具降血压、降尿酸功能性食品或医药保健品提供了理论依据;细胞水平上,后生元不具有降血糖功效,可能需要动物模型...     

儿童配方奶粉对Caco-2细胞钙转运及对成骨细胞增殖、矿化的影响

为评价某市售儿童成长配方奶粉的补钙和促进骨骼生长能力,以常见市售纯牛奶A作为对照,运用人结肠腺癌细胞（Caco-2）单层模型,研究其对钙离子转运的作用;运用成骨细胞（MC3T3-E1）矿化模型,研究其对成骨细胞增殖与矿化的影响。Caco-2细胞模型结果表明,各剂量组儿童配方奶粉组的钙转运量均高于市售纯牛奶A,但相较空白组无显著性差异（p<0.05）。成骨细胞增殖实验结果表明,5~50 μg/mL的儿童配方奶粉对成骨细胞均有促进增殖作用,增殖速度均在30%以上;并测定细胞碱性磷酸酶活性,当儿童配方奶粉质量浓度为50 μg/mL时,酶活达7.79 U/g蛋白,相较空白组极显著提高（p<0.01）,较市售纯牛奶A的效果更稳定。成骨细胞矿化结果表明,5~50 μg/mL儿童配方奶粉能显著促进成骨细胞产生矿化结晶,50 μg/mL时茜素红吸光值均为0.180,对比空白组提高50%以上,较市售纯牛奶A矿化程度更稳定。综上实验结果,儿童配方奶粉虽对钙在小肠上皮的转运吸收无明显促进作用,但很可能通过促进骨生长而对儿童生长发育起作用。     

牛乳酪蛋白源ACE抑制肽对大鼠的降血压作用

为了考察牛乳酪蛋白源血管紧张素转化酶抑制肽(Angiotensin I-converting enzyme inhibitory peptides,ACEI)的降血压作用,以自发性高血压大鼠(Spontaneously hypertensive rats,SHR)为动物模型,给予样品30 d后,检测大鼠的血压、心率、血清及尿液。与模型对照组相比,ACE抑制肽高、低剂量组和阳性对照组的收缩压分别为175、175、172 mm Hg,差异具有统计学意义(p0.01);ACE抑制肽高剂量组的降钙素基因相关肽(Calcitoningenerelatedpeptide,CGRP)浓度升至10.09pg/m L,差异具有统计学意义(p0.05);ACE抑制肽高剂量组的总钙(TCa)、内皮素-1(Endothelin-1,ET1)、血糖(Glucose,GLU)、总胆固醇(Cholesterol,CHOL)、高密度脂蛋白胆固醇(High density liptein cholesterol,HDL-C)、血尿酸(Uric acid,UA)浓度明显降低,分别降至2.06 mmol/L、8.69 pg/mL、6.41 mmol/L、1.13 mmol/L、0.29 mmol/L、108.20μmol/L,差异具有统计学意义(p0.05)。结果说明,在本实验条件下,ACE抑制肽不仅具有缓解大鼠心率过速与明显的降血压作用,也有助改善肾血管性高血压大鼠血清生化指标及肾功能指标,同时对血糖、血尿酸以及胆固醇有一定控制作用。ACE抑制肽可能通过升高血液CGRP、抑制ET1、降低血钙水平起到降血压作用。     

两种酪蛋白磷酸肽混合物的钙结合能力及物化性质比较

本研究探讨了两款市售酪蛋白磷酸肽产品在物化性质、钙离子结合能力的差异。钙乙醇法结果显示两款CPP产品的纯度具有较大差异（p<0.05）,CPP2的纯度是CPP1的1.36倍。体外钙离子螯合方法结果显示CPP1、CPP2的钙离子结合量分别是107.15 mg/g和142.56 mg/g,CPP2显著高于CPP1（p<0.05）。CPP1和CPP2的轻敲密度、Hausner比值和Carr''s指数指标结果存在显著差异（p<0.05）,CPP1的Hausner比值（1.52）显著高于CPP2（1.36）（p<0.05）,CPP1的Carr''s指数（34.40）显著高于CPP2（26.51）（p<0.05）。Hausner比值和Carr''s指数可以用来表示粉体的可压缩性和流动性,两种指标结果分析表明CPP2的流动性优于CPP1。CPP1、CPP2的休止角均高于40°,说明CPP1、CPP2都存在一定黏聚性,CPP2的休止角数值低于CPP1,结果表明CPP2的流动性略好于CPP1,与Hausner比值和Carr''s指数结果一致。30%乙醇溶解性结果表明CPP1（93.49%）和CPP2（7.46%）在30%乙醇溶解性存在极显著差异,两款CPP产品两款CPP在物质组成上有一定差异。两种CPP产品的纯度和钙结合能力成正比。两者粉末都存在一定黏聚性,流动性一般,CPP2强于CPP1。30%乙醇溶解性存在极显著差异,可能是影响钙片质量的主要因素。本研究为CPP作为食品添加剂的应用情况提供科学依据。     

生物合成对香豆酸大肠杆菌工程菌的构建

对香豆酸是一种具有预防心血管疾病、抗氧化和抗菌消炎等生物活性的酚类物质,同时,它也是高价值苯丙烷类保健营养品(如白藜芦醇)的前体。本研究希望创制出一种生物合成对香豆酸的方法,以缓解对香豆酸的供求问题。把带有粘红酵母(Rhodotorula glutinis)酪氨酸解氨酶(Rg TAL)基因的组成型表达载体转化大肠杆菌ATCC31884,并通过PCR鉴定后,获得重组菌株。对重组菌株进行发酵培养,对发酵液进行高效液相色谱检测,确定工程菌具有生物合成对香豆酸的能力。随后通过优化L-酪氨酸的添加量和工程菌的发酵时间,最终确定,底物L-酪氨酸的添加量为0.5 m M,发酵时间为36 h,检测发酵液中的对香豆酸含量最高,为161.23 mg/L。这表明,Rgtal基因在重组大肠杆菌中成功得到了表达,并且能利用自身代谢和外源添加的L-酪氨酸生物合成对香豆酸。     

黑曲霉N5-5产单宁酶的酶学性质与固定化

本实验室自主分离的黑曲霉N5-5所产单宁酶已发现对没食子酸丙酯具有良好酶解效果。为了单宁酶的工业化应用,本次研究大批量培养单宁酶,探究其对单宁酸的酶解效果及酶的固定化效果。发酵采用先液体扩培后固体发酵的形式,提酶后利用陶瓷膜过滤技术纯化、浓缩酶液,并对比冷冻干燥和喷雾干燥两种不同干燥方式,还使用树脂载体对酶进行固定化。实验表明,纯化后单宁酶酶活达258.53 U/mL,可水解10%至50%浓度的单宁酸,其中30%以下底物浓度酶解效果较好;冷冻干燥对酶活影响不大而喷雾干燥使酶活降为174.02 U/mL;另外,单宁酶通过树脂载体固定化后,在实验条件下可重复使用至少4次。研究为提高黑曲霉N5-5发酵所产单宁酶的媒介效率、降低酶解反应成本、实现商业化生产建立了理论基础。