北京市水产品污染与感染病例中副溶血性弧菌血清型和毒力基因型的比较研究

目的对北京市夏季市售水产品污染与感染病例中副溶血性弧菌血清型和毒力基因型进行比较研究,为评估食品安全风险监测的目的与意义提供思路,为北京市水产品副溶血性弧菌污染与临床感染病例的关联性研究提供技术支持。方法对采集的水产品样品和哨点医院腹泻患者粪便样本进行副溶血性弧菌的分离鉴定,采用血清玻片凝集法对分离出的副溶血性弧菌进行血清分型,PCR方法检测菌株的tlh、tdh、trh基因。结果 2014年7~9月共采集水产品样品164份,检出副溶血性弧菌80份,总污染率为48.78%;其中淡水产品污染率为38.78%(19/49),平均菌量浓度为66.63 MPN/g;海水产品污染率为53.04%(61/115),平均菌量浓度为38.14 MPN/g。80株副溶血性弧菌分属于9个血清群,其中O2群28株,占35.00%,O1群11株,占13.75%,O5群10株,占12.50%。80株菌tlh基因均为阳性,只有1株菌携带tdh毒力基因,所有菌株trh毒力基因均为阴性。哨点医院腹泻病人粪便样本中分离鉴定副溶血性弧菌21株,血清型O3∶K6占61.90%(13/21),O4:K8占28.57%(6/21);毒力基因型tdh(+)/trh(-)占95.24%(20/21),tdh(-)/trh(-)占4.76%(1/21)。结论来源于食品样品的副溶血性弧菌绝大部分不具备致病性,而导致消费者腹泻的副溶血性弧菌绝大部分携带致病性毒力基因,表明目前的食品安全风险监测结果不能作为评估副溶血弧菌导致的食源性疾病暴发和散发的依据。     

2015年我国食源性副溶血性弧菌毒力基因及 耐药特征研究

目的 探究我国2015年食品来源的副溶血性弧菌毒力基因分布情况和耐药特征。方法 通过聚合酶链式反应,研究1046株副溶血性弧菌携带毒力基因tlh、tdh和trh情况,并采用微量肉汤稀释法,测定副溶血性弧菌对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢唑林、头孢噻肟、头孢他啶、亚胺培南、庆大霉素、四环素、环丙沙星、左氧沙星、氯霉素、复方新诺明等抗生素的敏感性。结果 本研究所用1046株副溶血性弧菌中有965株（92.3%）对一种或多种抗生素耐药,总耐药率为92.2%。全部菌株对庆大霉素和左氧氟沙星敏感,对其余10种抗生素有不同程度耐药,耐药率最高的前三位抗生素分别为头孢唑林（85.4%）、氨苄西林（59.4%）、阿莫西林/克拉维酸（49.3%）。1046株副溶血性弧菌全部携带tlh基因,其中19株（1.8%）trh基因阳性,4株（0.4%）tdh基因阳性。毒力基因阳性的所有菌株均未发现多重耐药现象,部分毒力基因阳性菌株对青霉素类和第一代头孢类抗生素耐药。结论 我国2015年食品来源的副溶血性弧菌毒力基因携带率较低,但对第一代头孢类和青霉素类抗生素耐药率较高;水产养殖地区应在养殖环节应加强抗生素的管理并规范使用。     

我国市售婴儿配方乳粉中蜡样芽胞杆菌污染及其毒力基因调查

目的了解国内市售婴儿配方乳粉中蜡样芽胞杆菌污染及毒力基因分布情况。方法采用MPN法定量检测婴儿配方乳粉中的蜡样芽胞杆菌,在对分离菌株正确鉴定的基础上,开展腹泻型和呕吐型毒素产生相关毒力基因的分布研究。结果 135份婴儿配方乳粉中有57份检出蜡样芽胞杆菌,检出率为42.22%。平均污染水平为7.14 MPN/g。国产产品蜡样芽胞杆菌污染较进口产品重,网售产品较超市销售产品重,差异有统计学意义(P0.05)。共发现24种蜡样芽胞杆菌毒力基因携带模式,其中nhe基因携带率最高,达92.98%(53/57),其次为ent FM基因(71.93%),70.18%(40/57)的菌株同时携带nhe和ent FM基因。亚型分型结果显示nhe A、nhe B和nhe C基因的携带率分别为88.72%、88.72%和49.12%。溶血素BL基因携带率分别为hbl A 24.56%、hbl C 22.81%和hbl D 17.54%,cyt K基因携带率为22.81%。有8株菌既携带nhe的3个基因又携带hbl的3个基因。结论我国市售婴儿配方乳粉蜡样芽胞杆菌污染较重,分离到的蜡样芽胞杆菌菌株普遍携带毒力基因,建议加强对婴儿配方乳粉中蜡样芽胞杆菌污染的监管,并开展膳食暴露该菌对婴儿健康影响的风险评估,为制定婴儿配方乳粉中蜡样芽胞杆菌的限量标准提供依据。     

椰酵假单胞菌与唐菖蒲伯克霍尔德菌16S～23S rRNA基因间区序列的比较研究

目的研究比较我国分离的椰酵假单胞菌与唐菖蒲伯克霍尔德菌不同致病型菌株的16S～23SrRNA基因间区序列,分析不同菌株基因水平的差别,并阐述其系统发育关系。方法设计2对伯克霍尔德菌属特异引物,扩增16S～23SrRNA基因间区序列。应用分子生物学软件,对3株分别代表唐菖蒲伯克霍尔德菌3种不同致病型的国际参考菌株（ATCC10248、NCPPB947、NCPPB3580）、1株伯克霍尔德菌属B．phenazinium种代表株（LMG2247）及8株从我国不同地域、不同食物样品中分离的椰酵假单胞菌（HN2y、Co14、Co8、Co36、Sx8801、90—3、56（2）、56（2））的16S～23SrRNA基因序列进行测定,并与核酸数据库（GenBank）中相关菌株序列进行比较分析。结果通过不同菌株16S～23SrRNA间区序列的分析比较,发现分离的椰酵假单胞菌米酵菌酸产毒株存在2个序列高可变区及特异基因序列,阐述了我国椰酵假单胞菌与唐菖蒲伯克霍尔德菌的系统发育关系,将DNA测序结果在核酸数据库中注册,并绘制了系统发育进化树。结论该研究结果为进一步鉴定椰酵假单胞菌米酵菌酸产毒株,从分子水平探讨其产毒机制及系统发育关系提供了新的、可靠的理论依据和技术支撑。     

涂布平板计数法与MPN法定量检测禽肉和蛋中沙门菌的比较

为选择良好的禽肉和鸡蛋中沙门菌定量检测方法 ,通过染菌实验 ,分析比较了涂布平板计数法和MPN法 ,结果表明平板计数法优于MPN法。应用平板计数法检测了 16份鸡蛋和 2 6份禽肉试样。沙门菌检出限分别为 1CFU ml和 10 0CFU g。 16份蛋类试样中均未检出沙门菌。 2 6份鸡肉试样中 ,2 0份为沙门菌阳性 ,阳性率为 77%。其中 9份试样沙门菌数低于检出限 10 0CFU g ,其余试样菌数范围为 1 5× 10 2 ～ 2 5× 10 5CFU g。对 3份 - 2 0℃保存 5d的阳性禽肉试样应用MPN法进行了冷冻前后沙门菌含量的比较分析 ,储存后的菌数比冷冻前略有增加。实验结果表明 ,在食物试样中杂菌污染严重或沙门菌水平较低的情况下 ,平板法不能准确进行沙门菌计数 ,仍需进行MPN定量检测。     

北京市餐饮业食用冰块微生物污染水平调查

评估北京市餐饮业食用冰块微生物污染的风险。方法 在北京市场抽检了63份餐饮业食用冰块样品,冰块独立分装在无菌采样袋中,2 h内完成采样到检测的过程。按照国家标准方法检测其中的菌落总数、大肠菌群、沙门菌、志贺菌和金黄色葡萄球菌。结果 63份餐饮业食用冰块样品均未检出沙门菌、志贺菌和金黄色葡萄球菌等致病菌。连锁快餐店和咖啡店食用冰块的菌落总数和大肠菌群等指示菌计数较低,部分饮品甜品店食用冰块菌落总数和大肠菌群较高。结论 检测的食用冰块样品均是安全的。部分饮品甜品店用食用冰块指示菌较高,提示生产过程中可能存在微生物污染,需要严格执行卫生操作规范的程序。     

2012年中国食源性单核细胞增生李斯特菌耐药特征及多位点序列分型研究

研究2012年中国23个省市自治区10类食品中分离的635株单核细胞增生李斯特菌的耐药特征及多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)测定。方法 采用CLSI推荐的微量肉汤稀释法,选择氨苄西林、复方新诺明、四环素、庆大霉素、红霉素、环丙沙星、氯霉素和万古霉素8种抗生素,对耐药株进行MLST分型。结果 635株单增李斯特菌检测出66株耐药菌,平均耐药率为10.39%。耐四环素菌株最多为49株,其次为耐环丙沙星20株、红霉素10株、氯霉素7株、复方新诺明3株、氨苄青霉素1株、庆大霉素1株、万古霉素1株。耐受2种抗生素有8株,耐受3种及以上抗生素有7株。77株菌耐药性介于中介度,其中75株菌对环丙沙星耐药性介于中介度。耐药株MLST分型表明,ST155、ST9、ST705和ST87为我国单增李斯特菌耐药株常见型别。四环素和四环素-红霉素-氯霉素耐药谱在MLST聚类分析中有集中趋势,耐药菌株主要来源于熟肉制品和中式凉拌荤菜。结论 我国目前食品来源的单增李斯特菌耐药率普遍较低,但与往年相比呈现逐渐增加的趋势。耐药株的主要MLST型别分布与相关耐药谱在聚类分析中相互关联。     

浓缩乳清蛋白粉及其制品中梭状芽胞杆菌的分离及鉴定

目的采用多种方法对新西兰进口浓缩乳清蛋白粉及其制品、市售婴幼儿配方粉样品中分离的梭状芽胞杆菌进行鉴定。方法根据分离菌株的生长特性、革兰氏染色、生化反应、普通显微镜和电子显微镜下形态特征等表型特征,结合16S rRNA基因克隆测序及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱等结果,对分离菌株进行综合鉴定。结果 78份样品中有16份(20.5%)被梭状芽胞杆菌污染,其中2份为浓缩乳清蛋白粉及其制品,14份为婴幼儿配方粉样品。共分离到梭状芽胞杆菌17株,包括生胞梭菌12株、拜氏梭菌2株,丁酸梭菌2株和第三梭菌1株。结论新西兰进口浓缩乳清蛋白粉及其制品中厌氧微生物污染严重,经鉴定污染的主要微生物为生胞梭菌。     

2010年全国监测网食源性致病菌实验室检验质控考核的结果分析

目的为了摸底承担监测任务的检验技术机构的食源性致病菌检验能力,确保食源性致病菌检验结果的准确性和可比性,提高监测工作质量。方法制备考核样品,用辐照灭菌的奶粉添加食源性致病菌(沙门菌、金黄色葡萄球菌、肠出血性大肠杆菌、阪崎肠杆菌中的2~3种),经稳定性测试后对327个检验机构进行质控考核,用点分数法对上报结果进行评价,Pearsonχ2检验进行率的比较。结果 327个检验机构中有319个上报了检验结果,上报率为97.6%,其中299个检验机构的结果较满意,满意率为93.7%。4种细菌的漏检率不全相同,阪崎肠杆菌的漏检率要高于其他3种。2009年以前入网和2010年新加入监测点的满意率,省级和地市级疾病预防控制中心的满意率差异均没有统计学意义(P0.05)。结论本次质控考核为开展针对性的实验室培训提供了数据依据,也反映了全国监测点的4种食源性致病菌检验能力基本满足监测任务的需求。     

两种选择性培养基HE、CAS检测沙门菌效果的比较

目的 比较两种沙门菌选择性培养基HE和CAS在食物样本检测中的敏感性、准确性和时效性.方法 观察典型沙门菌和非沙门菌在两种选择培养基上的生长状况和菌落形态.通过人工染菌实验,比较两种选择性培养基分离沙门菌的检测效果.采集16份市售整鸡样本,进一步比较两种培养基沙门菌的阳性检出率.结果 沙门菌在HE平板上为绿色菌落,大多有黑心;在CAS平板上为紫色菌落.含菌量为10 CFU/25 g鸡肉样本,经SC增菌液增菌培养8h,可用CAS检出沙门菌;而采用HE则需增菌18 h才可检出.16份整鸡样本,增菌8,12和18 h,采用CAS的阳性检出率分别为43.75%、31.25%和37.5%,相应时间下采用HE的阳性检出率分别为18.75%,25%和18.75%,8份新鲜整鸡样本,检出4份阳性;8份冷冻整鸡样本,检出3份阳性.结论 CAS选择性平板可抑制大多杂菌生长,沙门菌在其上菌落形态较易鉴别.CAS分离沙门菌的检出时限和检测灵敏度都明显优于HE,建议在食物样本检测沙门菌时应首选CAS.