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目的:建立肉制品中单增李斯特菌环介导间接聚合酶链式反应检测体系,实现快速检测。方法:采用Chelex法从肉制品中分离模板DNA,根据单增李斯特菌hlyA基因的保守区设计两条探针,将探针标记于报告基因(大豆Lectin基因)的两端,此标记的报告基因与待测靶基因经杂交、缺口补平、环化后,采用反向聚合酶链式反应扩增报告基因,实现对靶基因的检测。结果:该检测体系检出限低于100CFU/g(mL),且与其他食源性致病菌的检测无明显交叉反应,对200份肉制品进行检测,阳性率为2.5%,与传统细菌分离检测结果完全相符。结论:环介导间接聚合酶链式反应可以快速、灵敏、特异检测肉制品中单增李斯特菌污染。 相似文献
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以米曲霉ZLF13菌株经固态发酵生产的真菌α-淀粉酶粗制品(发酵曲)为原料,对其提纯、精制的工艺条件和保存方法进行了研究。其最佳提纯工艺条件为:培养好的发酵曲采用40℃温水,pH值7.5左右,加水比为1∶4,浸泡3 h。压滤滤液经超滤浓缩后,在10~15℃,pH 6.0~6.5,与食用酒精混合为酒精体积分数为70%的溶液中静置沉析,过滤后于40℃低温干燥。采用该工艺条件进行粗酶提纯,产品综合回收率稳定在70%以上,最高达到74%,产品酶活力最高达25 416 u/g,平均达16 608 u/g,卫生标准达到食品级标准。通过精制酶的保存试验研究,确定了一种真菌α-淀粉酶稳定剂配方,其添加至精制酶后,常温下半年的酶活力保存率达到95%以上,1年的保存率可达到90%以上。 相似文献
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食源性单增李斯特菌的实时定量PCR检测 总被引:4,自引:1,他引:4
根据GenBank数据库单增李斯特菌的O基因序列(AF253320)设计引物,建立单增李斯特菌实时荧光定量PCR检测方法。标准曲线的相关系数为0.996,检出底限约8个细菌/反应,而常规PCR检出底限约60个细菌/反应。比较常规PCR和实时荧光定量PCR对人工污染样品检测,发现实时定量PCR也具有较高的灵敏度;对40份牛奶和40份火腿样品进行检测,阳性率分别为12.5%和10%,与传统细菌分离检测结果完全相符。因此,实时定量PCR检测单增李斯特菌具有快速、灵敏的优点,适宜于食品中单增李斯特菌污染的调查及监测。 相似文献
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