ActRⅡA在小鼠巨噬细胞中的表达

目的　克隆、表达重组融合蛋白ActRⅡA的C末端肽 ,制备抗ActRⅡAC末端抗体 ,并检测其在小鼠巨噬细胞中的表达。方法　构建GST ActRⅡAC末端蛋白表达质粒 ,经SDS PAGE分析表达蛋白。以GST ActRⅡAC末端蛋白为抗原免疫家兔制备抗ActRⅡAC抗体 ,采用免疫细胞化学染色技术观察ActRⅡA在巨噬细胞的分布。结果　克隆得到的ActRⅡAC末端cDNA ,经DNA测序证实所克隆的cDNA与GenBank收录的ActRⅡAC末端基因序列完全相符。SDS PAGE分析表达的GST ActRⅡAC蛋白相对分子质量约为 3 70 0 0。采用亲和层析纯化的抗ActRⅡAC末端抗体进行免疫细胞化学染色显示 ,ActRⅡA在小鼠巨噬细胞中高水平表达。结论　已成功地构建了ActRⅡAC末端表达质粒 ,制备了抗ActRⅡAC末端抗体并证实小鼠巨噬细胞表面存在ActRⅡA。     

白藜芦醇对内质网应激介导的原代神经元细胞作用机制

目的：探讨白藜芦醇（resveratrol,Res）对衣霉素（tunicamycin,TM）诱导内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）模型的神经保护作用及其作用机制。方法：取怀孕18 d孕鼠分离的胎鼠海马神经元进行原代培养,设置对照组（不作处理）、TM组（质量浓度2.5 μg/mL）、Res组（5 μmol/L）和Res＋TM组（5 μmol/L Res预处理＋质量浓度2.5 μg/mL TM进一步共处理）,采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK8）检测海马神经元存活率并筛选TM和Res最佳作用浓度和时间;利用流式细胞仪分别检测原代神经元凋亡水平和周期状态,通过Western blot分析细胞ERS、自噬、凋亡和周期的相关蛋白变化。结果：5 μmol/L Res预处理10 h后能减轻TM对原代神经元细胞存活率的抑制作用,使神经元细胞周期重激活,促使其由G1/G0期向S期进行。与TM组相比,Res预处理10 h组（R10T组）的葡萄糖调节蛋白78（glucose regulated protein 78,GRP78）、Caspase 3相对表达量极显著或显著降低（P＜0.01、P＜0.05）,而自噬相关蛋白Beclin-1、微管结合蛋白1轻链3（microtubule-associated protein1 light chain 3,LC3）B相对表达量显著升高（P＜0.05）,磷酸化糖原合成酶激酶3β（phosphorylated glycogen synthase kinase 3β,p-GSK3β）、凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma 2,Bcl2）蛋白相对表达量高度显著或极显著升高（P＜0.001、P＜0.01）,抑制TM引起的细胞凋亡。结论：Res可以减轻TM引起的原代神经元ERS,对原代神经元起到保护作用,其作用机制与Res对细胞存活率、周期分布和自噬、凋亡相关蛋白表达调节有关。     

玉米黄素对衣霉素诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

研究玉米黄素对衣霉素诱导损伤的神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）的保护作用。实验分为空白组、损伤组（模型组）、2、5、10 μmol/L玉米黄素保护组。用衣霉素（tunicamycin,TM）建立SH-SY5Y细胞损伤模型,噻唑蓝测定细胞存活率,试剂盒法测定培养液中的乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）水平。结果显示：TM质量浓度在2 μg/mL以上时,可显著降低SH-SY5Y细胞活性（P＜0.01）;与TM损伤组相比,2～10 μmol/L玉米黄素预处理可显著提高细胞存活率（P＜0.05）,降低LDH的释放率,先用TM处理30 min后再加2、5、10 μmol/L的玉米黄素处理24 h的玉米黄素后处理组结果相同。因此,TM通过诱导内质网应激可引起细胞损伤,玉米黄素能够减轻该损伤作用,并且在一定程度上可逆转TM引起的损伤。     

婴幼儿乳品中叶酸的微生物测定方法

按照GB 5413.16-2010、GB/T 5009.211-2008及Biostest叶酸检测试剂盒等不同方法,对同一乳制品样品叶酸含量进行测定,同时进行加标回收试验。结果表明,依据GB 5413.16-2010,在制备标准测试管时,使用两种浓度的含抗坏血酸的磷酸缓冲液稀释获得的叶酸标准工作液,同时样品测试液也由抗坏血酸的磷酸缓冲液稀释获得,测得叶酸质量分数为40.45μg/hg,回收率为71%。而参照GB/T 5009.211-2008,只使用一种浓度的用水稀释获得的叶酸标准工作液,同时样品测试液也由水稀释获得,测得同一样品的叶酸质量分数为70.5μg/hg,回收率为92.6%。使用Biostest叶酸检测试剂盒测得同一样品的叶酸质量分数为73.71μg/hg,回收率为99%。不采用含抗坏血酸的磷酸缓冲液而是用水稀释获得标准工作液和样品测试液,测试婴幼儿乳制品叶酸含量,加标回收率较高,测试结果可以接受。     

益生菌类保健食品中双歧杆菌计数不确定度的评定

依据《食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验》(GB 4789.35-2016),益生菌类保健食品中的双歧杆菌计数的样品稀释和加样过程中,既可以使用1 mL无菌吸量管也可以使用微量移液器。本研究的目是比较两种量具对双歧杆菌计数的测量不确定度产生的影响。根据中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布的《测量不确定度评定与表示》(JJF 1059.1-2012),对益生菌类保健食品中双歧杆菌计数的测量不确定度进行评定。不确定度评定主要从影响较大的样品制备、样品稀释、加样和重复检测等几方面进行,样品的双歧杆菌计数过程中样品稀释和加样时分别使用1 mL无菌吸量管和微量移液器。当包含率在95%时,使用吸量管进行稀释和加样时,样品中双歧杆菌计数检测结果的扩展不确定度U为0.28,样品双歧杆菌数的对数值区间为9.35～9.91,样品中双歧杆菌数的置信区间为(2.2～8.1)×10~9CFU/g。以移液器作为稀释和加样量具,扩展不确定度U为0.36,样品中双歧杆菌数的对数值区间为9.43～10.15,样品双歧杆菌数的置信区间为(2.7～14)×10~9CFU/g。益生菌类保健食品中双歧杆菌的数量较大,稀释倍数大,因此样品稀释引入的不确定度均较大,约占90%。样品稀释和加样过程中使用吸量管与使用移液器相比,使用吸量管带入的不确定度均略小,而使用吸量管对A类不确定度的影响比使用移液器略大。使用吸量管双歧杆菌计数检测结果的扩展不确定度略低。另外,使用两种量具对同一益生菌类保健食品中双歧杆菌进行计数,结果差异显著。     

白藜芦醇诱导Raji细胞死亡的自噬途径

目的探讨白藜芦醇对Burkitt B淋巴瘤Raji细胞的增殖抑制作用及诱导死亡途径。方法用白藜芦醇处理Raji细胞,透射电镜及MDC染色检测细胞死亡;Western blot法检测Caspase-3、细胞色素c及CathepsinD蛋白的表达。结果白藜芦醇可明显抑制Raji细胞增殖,电镜观察细胞内出现了大量的自噬小泡,MDC染色后细胞点块状荧光结构明显增加。Western blot分析显示,白藜芦醇可引起细胞色素c从线粒体释放,但释放量与Jurkat细胞相比明显减少,且不能导致Caspase-3的活化。Cathepsin D活性成分32kD片段随白藜芦醇处理时间的延长而减少。结论白藜芦醇可抑制Raji细胞增殖,并通过Caspase非依赖途径诱导细胞自噬死亡。     

玉米黄素对内质网应激引发的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的:研究玉米黄素对内质网应激引起的细胞凋亡的保护作用。试验分为空白对照组、衣霉素(TM)损伤组(5 μg/mL)、玉米黄素保护组(5 μmol/L)和损伤加保护组。采用Caspase 3试剂盒检测Caspase 3活性的变化;采用Western Blot法测定凋亡相关蛋白PERK、CHOP,PERK下游信号分子elF2α和ATF4,以及自噬相关蛋白Beclin 1。结果显示:与TM模型组相比,玉米黄素处理后PERK及其下游调控蛋白elF2α和ATF4的表达能力显著下降(P<0.01),Beclin 1的水平显著升高(P<0.01)。与未加自噬抑制剂相比,玉米黄素组的GRP78水平显著升高(P<0.01)。与对照组相比,TM模型组的CHOP蛋白的表达水平极显著升高(P<0.01),而玉米黄素处理组CHOP蛋白的表达水平极显著低于TM模型组(P<0.01)。结论:玉米黄素能减轻由内质网应激引起的损伤作用,并且可逆转TM引起的损伤。其作用机制是:玉米黄素通过抑制PERK通路,进而抑制GRP78与ERS感受器的分离,降低促凋亡因子CHOP的水平,通过调控保护性自噬来缓解ERS。     

激活素受体相互作用蛋白在海马神经细胞中的表达及其作用

目的　在发现和克隆新的激活素受体相互作用蛋白 3(ActRIP3)基因的基础上 ,探讨ActRIP3在海马神经细胞介导激活素信号传导的作用。方法　利用GST- ActRIP3融合蛋白免疫家兔制备抗ActRIP3抗体 ,采用RT -PCR及免疫组化染色分析ActRIP3在脑组织中的表达与分布 ,采用pcDNA-ActRIP3与CAGA -lux质粒共转染海马神经细胞 ,分析信号传导作用。结果RT- PCR及免疫组化染色显示ActRIP3在海马神经细胞中高表达 ,构建的pcDNA- ActRIP3表达载体在体外培养海马神经细胞中可有效表达ActRIP3蛋白 ,过表达ActRIP3可促进激活素诱导的海马神经细胞特异信号传导。结论　ActRIP3具有促进激活素信号传导作用 ,是介导激活素作用于海马神经细胞的关键性信号传导蛋白。     

ActRⅡA在小鼠巨噬细胞的表达

目的：克隆、表达重组融合蛋白ActRⅡA的C末端肽，制备抗ActRⅡA C末端抗体，并检测其在小鼠巨噬细胞中的表达。方法：构建GST－ActRⅡAC末端蛋白表达质粒，经SDS－PAGE分析表达蛋白，以GST－ActRⅡA C末端蛋白为抗原免疫家兔制备抗ActRⅡAC抗体，采用免疫细胞化学染色技术观察ActRⅡA在巨噬细胞的分布。结果：克隆得到的ActRⅡAC末端cDNA，经DNA测序证实所克隆的cDNA与GenBank收录的ActRⅡAC末端基因序列完全相符。SDS－PAGE分析表达的GST－ActRⅡA C蛋白相对分子质量约为37000。采用亲和层析纯化的抗ActRⅡAC末端抗体进行免疫细胞化学染色显示，ActRⅡA在小鼠巨噬细胞中高水平表达。结论：已成功地构建了ActRⅡAC末端表达质粒，制备了抗ActRⅡAC末端抗体并证实小鼠巨噬细胞表达存在ActRⅡA。     

阿尔茨海默病中β淀粉样蛋白作用机制的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一种常见的中枢神经系统退行性病变,老年人是高发人群,严重影响老年人的健康及生活质量。AD患者脑内形成神经炎性淀粉斑,即老年斑(senile plaque,SP)是其病理特征之一,SP主要由细胞外的β淀粉样蛋白(Amyloid-β,Aβ)沉积而成。Aβ是一个具有β片层的二级结构多肽,由淀粉样前体蛋白(APP)经水解产生后在脑内聚集,引发相应的神经毒性,造成神经元死亡,从而导致AD的发生和发展。Aβ在AD发病过程中起着重要作用,但其具体作用机制尚未明确。本文就近年来对Aβ的产生、分布与清除、传递与运输的研究进展作一综述。