冬凌草甲素诱导小鼠肝癌细胞醌还原酶活性及其机理研究

为筛选鉴定出溪黄草中抗癌活性组分,本研究以溪黄草为材料得到乙酸乙酯提取物,通过硅胶柱层析、半制备色谱分离纯化,利用小鼠肝癌细胞Hepa1c1c7体外模型测定分离产物对细胞存活率和醌还原酶(quinone reductase,QR/NAD(P)H:reductase 1,NQO1)诱导活性。通过核磁共振、质谱分析鉴定组分结构;采用细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPK)p38、蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)和c-Jun N-末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)5种蛋白激酶的特异性抑制剂,确定冬凌草甲素诱导QR活性的信号转导通路,采用实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)和Western blot法分别检测NQO1的m RNA和蛋白表达情况。结果:1)从溪黄草中筛选鉴定出一较强诱导QR活性组分为冬凌草甲素;2)冬凌草甲素质量浓度为0.94μg/m L时,即可诱导QR活性倍增;3)PI3K抑制剂处理显著抑制冬凌草甲素诱导的QR活性,而ERK抑制剂处理显著促进冬凌草甲素诱导的QR活性,但PKC、p38和JNK抑制剂处理对冬凌草甲素诱导的QR活性无明显影响;4)冬凌草甲素显著提高细胞内NQO1的m RNA和蛋白表达水平。结论:溪黄草中的冬凌草甲素具有抗癌活性,其抗癌活性通过提高Hepa1c1c7细胞中NQO1基因的转录及翻译水平以增加QR活性实现,并且其抗癌功能主要通过激活PI3K通路、抑制ERK通路进行信号传导。研究结果为深入开展溪黄草和冬凌草甲素的癌症化学预防研究奠定前期理论基础。     

三种菊科植物抗癌抗炎组分分离与功能研究

本研究以甜叶菊、蒲公英、野菊花三种菊科植物为材料,采用水、乙醇/乙酸乙酯、甲醇和正己烷4种溶剂提取,硅胶柱层析、TLC分离纯化,以小鼠肝癌细胞Hepa 1c1c7和小鼠巨噬细胞Raw 264.7为模型,通过测定醌还原酶活性和一氧化氮抑制率,筛选具有抗癌和抗炎的活性组分。结果:甜叶菊、蒲公英、野菊花的乙醇/乙酸乙酯提取物经分离纯化后得到最强活性组分,其诱导醌还原酶倍增的浓度分别为0.26-1.59μg/mL、0.45-3.73μg/mL和0.60-0.92μg/mL;甜叶菊、蒲公英组分一氧化氮抑制率达到50%的浓度分别为14.02-19.04μg/mL、48.90-86.05μg/mL。这一研究结果为深入开展菊科植物抗癌抗炎功能成分的分离鉴定及其作用机理打下了前期研究基础。