2018-2019年广东省和江苏省手足口病病原分子流行特征分析

目的 分析广东省和江苏省2018-2019年手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)病原分子流行特征,为HFMD的防控及疫苗研发提供依据.方法 对2018-2019年广东省和江苏省5个临床中心监测的HFMD病例采集咽肛拭子,荧光PCR检测为肠道病毒(enterovirus,EV)阳性...     

甲型肝炎病毒在太平洋牡蛎中的富集及消减规律

目的 探讨总甲型肝炎病毒(hepatitis Avirus,HAV)和活HAV在太平洋牡蛎消化腺中富集和净化消减动态规律,以及在牡蛎不同组织中的分布.方法 通过人工暂养太平洋牡蛎和人为HAV污染养殖水体,并自染毒24h后净化养殖的方式,建立牡蛎体内HAV富集和净化衰减模型.采用免疫沉淀提取结合一步法实时荧光定量RT-P...     

多价手足口病疫苗：现实与梦想

手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)是一种常见于5岁以下婴幼儿和儿童的急性传染性疾病[1]。过去的20年里,HFMD在世界范围内,特别是亚太地区频频暴发[2],少数患儿并发病毒性脑炎、脑干脑炎、肺水肿、急性弛缓性麻痹等重症甚至死亡[3]。HFMD已成为亚太地区重要的公共卫生问题之一。肠道病毒(enterovirus,EV)是引起HFMD的主要病原体,属于微小核糖核酸病毒科,肠道病毒属,包括EV-A^L和RV-A^C共15个种,其中EV-A的多种病毒为引起HFMD暴发的主要病原体。     

2018年肠道病毒71型灭活疫苗国家监督抽验质量分析及评价

手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)已成为世界范围特别是西太区的重大公共卫生问题[1]。研究显示,多种肠道病毒可引起HFMD[2],其中肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)是导致重症及死亡病例的主要病原体[3-4],可引起5岁以下婴幼儿出现无菌性脑膜炎、脑干脑炎、神经源性肺水肿、心衰等多种中枢神经系统重症疾病甚至死亡[5-7]。EV71疫苗为全病毒灭活铝佐剂吸附疫苗,是近年来新批准应用于婴幼儿的预防性疫苗,为防控严重HFMD提供了有效工具[4-5]。3万余名婴幼儿历时2个流行季的Ⅲ期临床试验证实,EV71疫苗具有良好的保护效果及安全性,预防EV71相关HFMD的保护率分别为97.4%、94.8%和90.0%,对重症HFMD的保护率为100%[8-10]。     

甲型肝炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及在贝类检测中的应用

目的建立甲型肝炎病毒(hepatitis A,HAV)荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测方法,用于贝类中HAV的检测。方法选择HAV高度保守的5’UTR区设计引物及探针,以HAV质粒为标准品,HAV活病毒为样本,建立HAV qRT-PCR检测方法;验证该方法的特异性、灵敏度、重复性、准确性及中间精密度;采用建立的方法检测HAV活病毒和贝类样本,并与我国贝类HAV检测国标方法(GB/T22287-2008法)进行比较。结果通过14对引物探针分别对HAV质粒(101~108拷贝/μL)检测结果的比较,选择灵敏度最优的Pan1引物,建立了HAV qRT-PCR检测方法(PAN法)。PAN法对CVA16、CVB3、EVA71、PV等11种RNA病毒均无阳性扩增;灵敏度达10 TCID50/mL;检测2.699~5.699 LgTCID50/mL各浓度HAV活病毒的回收率为82.9%~127.0%,单人和双人检测的变异系数分别为3.0%~7.0%和2.6%~8.4%。PAN法检测HAV活病毒的灵敏度(10 TCID50/mL)优于GB/T22287-2008法;两种方法对20份贝类样本的检测结果均为阴性,符合率为100%。结论建立的PAN法具有良好的特异性、灵敏度、准确性、重复性和中间精密度,可用于贝类样本中HAV的核酸定量快速检测。     

柯萨奇病毒A组6型通用抗原检测试剂盒的建立

目的 建立柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CV-A6)疫苗抗原定量检测试剂盒,用于CV-A6疫苗以及含有CV-A6的手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)多价疫苗的研发及质量控制.方法 分别采用多个CV-A6毒株与多家企业的CV-A6抗原,通过结合能力和中和...     

相关疫苗上市后中国大陆肠道病毒71型C4亚型的分子流行特征分析

目的 分析相关疫苗上市后中国大陆肠道病毒71型（enterovirus type 71,EV71）C4亚型的分子流行特征。方法基于贝叶斯的马尔可夫链蒙特卡罗（markov chain monte carlo,MCMC）分析方法,对EV71疫苗上市前后中国大陆EV71毒株VP1基因相似性进行比较。应用贝叶斯天际线模型和SpreaD3 v0.9. 6软件对中国大陆C4亚型病毒进行系统发生地理学分析,通过绘制贝叶斯天际线图描绘种群动态历史变化,并应用EasyCodeML软件分析正选择压力位点。结果 中国大陆EV71 C4亚型VP1基因序列的平均进化速率为2.25×10-3site/year,C4a亚型毒株平均进化速率为3.1×10-3site/year;EV71 C4亚型的起源可追溯至1990年的华东地区,C4a亚型可能起源于1999年。2002—2007年C4亚型经历了种群规模扩张,种群规模于2007年达峰值,且在EV71疫苗上市后仍保持较高水平。C4亚型病毒VP1基因中有5个氨基酸位点承受正选择压力,比对分析EV71疫苗上市后2015—2018年C4亚型病毒序列,筛选到VP1基因第289...     

肠道病毒71型全病毒灭活疫苗(C4亚型)的交叉中和特性

目的 评价肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)全病毒灭活疫苗(C4亚型)的交叉中和特性.方法 采用微量细胞病变法检测我国EV71全病毒灭活疫苗(C4亚型)免疫血清(46份)对B0 ～ B4、C1、C2、C4和C5亚型的中和效价,计算几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)及其...     

重组SARS-CoV-2蛋白疫苗抗原含量通用检测试剂盒的研制

目的 制备重组严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)蛋白疫苗抗原含量通用检测试剂盒，并进行验证。方法 选用中国食品药品检定研究院(简称中检院)制备的羊抗S蛋白多克隆抗体作为包被抗体，从4株单克隆抗体(14C8、15F9、17A7和20D8)中筛选出1株具有受体结合域(receptor-binding domain,RBD)结合活性高，且广谱抗主要突变株的单克隆抗体作为酶标抗体(用HRP标记)，制备重组SARS-CoV-2疫苗抗原含量的双抗体夹心ELISA法通用检测试剂盒，并采用棋盘滴定法对包被抗体稀释度(1∶125～1∶4 000)和酶标抗体稀释度(1∶250～1∶32 000)进行优化。验证试剂盒的专属性、线性范围、准确性、精密性及耐用性。将制备的通用检测试剂盒分发给12个实验室，检测各实验室自制的不同表达系统(CHO细胞、毕赤酵母、Sf9细胞或大肠埃希菌)和目的蛋白(RBD或S蛋白)的15批重组SARS-CoV-2蛋白疫苗原液(包括11批以WT株为参考序列设计的原液及4批以...