土茯苓黄酮与鲣鱼蛋白肽的交互作用研究

选取土茯苓和鲣鱼为原料,制备土茯苓黄酮和鲣鱼蛋白肽。以黄酮提取率、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH·)清除活性和黄嘌呤氧化酶(XOD)抑制活性为指标筛选土茯苓黄酮,以蛋白质回收率、DPPH·清除活性和XOD抑制活性为指标优化鲣鱼蛋白肽水解酶,并分析最佳酶解液的总氨基酸含量。将筛选出的土茯苓黄酮和鲣鱼蛋白肽进行交互作用,研究其产物的XOD抑制活性和DPPH·清除活性变化,最后用荧光光谱法探究交互作用的可能机理。研究表明,醇提土茯苓黄酮的提取率、XOD活性和DPPH·清除活性都显著高于水提土茯苓黄酮,鲣鱼蛋白肽的最佳处理酶为木瓜蛋白酶,二者交互作用后发现,产物的XOD抑制活性显著提高,且其DPPH·清除活性表现出明显的协同增效作用,巴士杀菌有助于提高其DPPH·清除活性,而高温灭菌后DPPH·清除活性显著降低,pH 6.0时交互作用产物DPPH·清除活性最高。结合荧光光谱分析,推测土茯苓黄酮与鲣鱼蛋白肽可能通过氢键结合形成新的产物。     

驴骨素蛋白质组学研究

采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDSPAGE）、二维电泳和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（matrix assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF/TOF/MS）等技术手段揭示驴骨素蛋白的性质和组成,为具有特征生理活性的驴骨生物活性肽的深层次开发提供依据。结果表明,驴乳粉蛋白含量为47.82 g/100 g,分子量在10 kDa～250 kDa间呈弥散型分布,等电点均匀分布在4.5～6.5之间。通过与马科蛋白图库进行对比,检索出89种蛋白,对这些蛋白进行基因本体论（gene ontology,GO）分类和京都基因与基因组百科全书（kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）信号通路富集,发现这些蛋白参与间充质迁移、氨基酸刺激的细胞反应、核小体组装、视网膜稳态、软骨内骨形态发生中的软骨发育等生物过程,也参与血小板激活、黏附斑、蛋白质的消化与吸收等信号通路。     

驴骨胶原蛋白开发为化妆品原料的安全与功效性评价

初步探究驴骨胶原蛋白开发为化妆品原料的安全性与功效性。以驴骨胶原蛋白作为研究对象,通过细胞毒性试验、鸡胚绒毛尿囊膜试验、3D皮肤模型、自由基清除试验等对驴骨胶原蛋白的安全性、功效性进行分析。结果显示,10 mg/mL以下浓度的驴骨胶原蛋白对 HaCaT 细胞和 NHDFs 细胞无毒性,且有一定促细胞增殖作用;驴骨胶原蛋白无光毒性作用,无眼刺激性/腐蚀性作用,无皮肤刺激性/腐蚀性作用。1.5%驴骨胶原蛋白能够显著修复受损皮肤屏障、抑制IL-1α的表达,效果接近于地塞米松。驴骨胶原蛋白对DPPH自由基具有良好的清除作用,IC_(50) 为3.83%。结果表明,驴骨胶原蛋白具有开发为化妆品原料的安全性与功效价值。     

驴脂组成成分及其油脂的品质指标分析

研究了驴脂的元素谱库、营养成分组成,测定了驴脂提取分离产物驴油的品质指标。以电感耦合等离子体质谱技术(ICP-MS)对驴脂中37种金属元素进行扫描分析,形成样本的元素谱库,结果表明驴脂中各金属元素均未达到检出限。以多质量分析器组合式质谱仪对驴脂进行MSn级扫描,最终获得驴脂中主要成分信息,发现驴脂主要成分中包含16种氨基酸及其衍生物类、11种有机酸、46种脂质以及糖类、维生素类等多种成分。采用超声辅助溶剂提取法得到的驴油相对密度为0. 908,水分含量为0. 68%,酸价(KOH)为0. 58 mg/g,过氧化值为0. 018 g/100 g,碘值(I)为85g/100 g。研究储存温度对驴油过氧化值的影响,结果表明驴油常温下即可储存。驴脂可作为食品、化妆品的研发原料,具有广阔的应用前景。     

核桃蛋白的分离制备及其酶解物的抗氧化特性

根据蛋白在水溶液、盐溶液、醇溶液及碱性溶液中的溶解性不同,从核桃粕中分离得到四类不同性质的蛋白组分:清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白,其中球蛋白和谷蛋白含量较高,分别为16.90%和71.40%。以脱脂脱酚粕、谷蛋白和球蛋白为原料,分别制备蛋白酶解液,以DPPH自由基清除率和蛋白质回收率为指标,对蛋白酶解工艺条件进行优化,探讨蛋白酶解液的分子量分布与抗氧化活性的关系。结果表明:在碱性蛋白酶、pH8及酶解9h的条件下,蛋白酶解液有较高的DPPH·清除率和蛋白回收率;脱脂脱酚核桃粕酶解液DPPH·清除率83.29%高于谷蛋白酶解液79.25%和球蛋白酶解液72.27%,蛋白回收率分别为69.83%、66.42%和73.71%。脱脂脱酚粕、谷蛋白和球蛋白酶解液以小分子肽居多,其中相对分子量≤1000的肽段分别占总量的42.73%、63.91%和55.10%,推测其抗氧化活性可能与小分子肽含量有关。     

驴骨胶原蛋白成分分析及促进皮肤修复活性的研究

为从分子水平探究驴骨胶原蛋白的功效物质基础和驴骨胶原蛋白对受损皮肤屏障的修复作用，本实验采用超高效液相色谱综合高分辨率轨道分析质谱（UPLC-Orbitrap MS）技术定性分析驴骨胶原蛋白的有效成分，用5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-bromodeoxyuridine, BrdU）渗入法和细胞划痕实验检测驴骨胶原蛋白对角质形成细胞增殖和迁移的影响，以探究其对皮肤的修复作用。结果表明:驴骨胶原蛋白的蛋白含量为57.5%，具有典型的胶原氨基酸组成。驴骨胶原蛋白含有较为丰富的氨基酸、维生素、糖类和脂质等活性成分。0.15 g/mL的驴骨胶原蛋白促进人表皮角质形成细胞（HaCaT细胞）增殖和迁移的效果与5%胎牛血清类似，显著优于空白对照组（P<0.05）。最终推断驴骨胶原蛋白能够加速表皮屏障修复，其机制可能与促进角质形成细胞增殖和迁移有关。     

阿胶低聚肽的成分分析及其抗氧化活性

采用复合酶解法制备阿胶低聚肽,分析阿胶低聚肽的营养成分、氨基酸组成和分子量分布,并比较阿胶与阿胶低聚肽清除自由基和防护H₂O₂诱导成纤维细胞氧化损伤的能力。结果表明,阿胶低聚肽含有8种人体必需氨基酸和2种半必需氨基酸,疏水性氨基酸占比较高,约占氨基酸总量的46.23%。阿胶低聚肽的相对分子质量主要集中在900 Da以下,约83.87%。阿胶和阿胶低聚肽对DPPH、ABTS自由基清除率的IC₅₀值分别为1.89和1.39、3.33和2.06 mg/mL。10 mg/mL阿胶和阿胶低聚肽的预处理可使H₂O₂诱导损伤的成纤维细胞存活率分别提高了6.72%和14.34%,SOD的活性分别提升了178.04%和497.88%,减少了细胞内ROS水平。表明,阿胶和阿胶低聚肽均可清除DPPH、ABTS自由基和减轻H₂O₂诱导的成纤维细胞的氧化损伤,且阿胶低聚肽的效果优于阿胶。