巨大芽孢杆菌L2发酵产物对魔芋软腐病菌的抑菌机制

目的：探究巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）L2发酵产物对贮藏期魔芋软腐病菌——胡萝卜软腐欧文氏菌（Erwinia carotovora subsp. carotovora）EC-1的抑菌机制。方法：以巨大芽孢杆菌菌粉为原料提取发酵产物,用常压硅胶柱层析分离得到发酵产物流分LE4-1～LE4-7,经抑菌实验筛选得到对胡萝卜软腐欧文氏菌EC-1有良好抑菌作用的流分,再使用气相色谱-质谱（gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS）法对其进行成分分析;并通过测定其半数抑制质量浓度（half maximal inhibitory concentration,IC50）、菌液电导率、核酸蛋白泄漏、可溶性总糖质量浓度、菌体总蛋白、菌体磷代谢及胞内活性氧水平对其抑菌机制进行研究。结果：巨大芽孢杆菌L2流分LE4-3对胡萝卜软腐欧文氏菌EC-1有良好抑菌作用,经GC-MS检测其主要成分为苯乙酸乙酯（32.190%（相对含量,后同））、亚油酸乙酯（15.819%）、苯乙酸甲酯（13.793%）等;LE4-3对胡萝卜软腐欧文氏菌EC-1的IC50为（1.06±0.01）mg/mL,并初步推测其作用机制是通过影响细胞膜完整性、损伤细胞结构、抑制细胞蛋白质合成及能量代谢等对胡萝卜软腐欧文氏菌EC-1发挥抑菌作用,因此巨大芽孢杆菌L2流分LE4-3在魔芋抗软腐病贮藏中具有良好的应用前景。     

黑曲霉泡腾片对烟草青枯病防效及烟株生长的影响

以云烟87为试材,研究黑曲霉（Aspergillus niger）泡腾片生防菌剂对烟草农艺性状的影响和对烟草青枯病的防治效果。盆栽 试验表明,黑曲霉泡腾片稀释800倍时,对烟草青枯病的防治效果可达92.9%,显著高于稀释1 200倍的多粘类芽孢杆菌（Peanibacillus ploymyxa）（42.9%）的防效（P＜0.05）。大田试验表明,黑曲霉泡腾片在提高烟草叶片数、叶长、叶宽、直径、株高等农艺性状方面优于 清水对照,表现出良好的促生效果;对采收的烤烟进行送检,结果表明,施用泡腾片的烟叶呈现出良好的评吸效果。     

黑曲霉泡腾片制备工艺优化

该研究采用粉末直接压片法制备黑曲霉（Aspergillus niger）泡腾片,以崩解时限、pH值、发泡量为评价指标,通过单因素试验和正交试验对黑曲霉泡腾片的工艺参数进行优化。结果表明,黑曲霉泡腾片的最佳制备工艺为酒石酸和碳酸氢钠比例1.00∶1.25、崩解剂添加量70%、黑曲霉孢子粉添加量15%、质量分数为10%的聚乙二醇6000乙醇溶液为润滑剂,添加量为3.15 g/mL,质量分数为2.5%为聚乙烯吡咯烷酮乙醇溶液为粘合剂,添加量为7 g/mL。在此优化条件下所得的黑曲霉泡腾片表面光滑,黏冲不明显,pH值为5.7,且崩解时限（23 s）、发泡量（40.79 mL/g）、硬度（4.3 kg）均符合2015版《中国药典》的规定,在水中可迅速崩解。     

高效液相色谱法测定黑曲霉xj菌丝体中糠醛的含量

建立了黑曲霉（Aspergillus niger）xj菌丝体中糠醛含量测定的条件和方法。菌丝体经乙醚提取,采用Spheriorb C18 色谱柱（5 μm,4.6 mm×150 mm）,流动相为乙睛∶0.1%乙酸水（冰乙酸调）（体积比10∶90）,柱温30 ℃;流速1.0 mL/min,波长l=277 nm紫外检测器检测的条件下,糠醛呈现良好的分离效果和重现性。其保留时间为5.482 min,最低检出限为0.01 mg/kg,平均回收率为90.51%～93.54%,精密度实验结果相对标准偏差（RSD）为0.98%。测得黑曲霉菌丝体中糠醛含量为1.872 mg/kg,该方法简便、快速、分离效果好,可为今后测定黑曲霉菌丝体中糠醛含量提供一定参考。     

巨大芽孢杆菌L2粗提物的抑菌效果及其抑菌成分分析

对巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）L2粗提物进行初步分离,以青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）为指示菌进行活 性追踪,并利用气质联用（GC-MS）法分析其活性成分。结果表明：粗提物洗脱组分LE4-5在质量浓度为1.4 mg/mL时对青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）RS-2、根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）T-37及胡萝卜软腐欧文氏菌（Erwinia carotovora）EC-1的抑制 率分别为91.04%、59.58%及23.83%;对菌株RS-2和T-37的IC50值分别为（0.512±0.056) mg/mL和（1.215±0.078）mg/mL。GC-MS分析结果 发现,粗提物洗脱组分LE4-5的主要成分为亚油酸（23.607%）、亚油酸甲酯（14.444%）、油酸（4.337%）等不饱和脂肪酸。     

拮抗菌巨大芽孢杆菌L2发酵条件的响应面优化

为探明拮抗菌巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）L2的发酵条件,提高其抑菌活性,以链格孢菌（Alternaria alternaria）为指示菌,以抑菌圈直径为响应值,优化其发酵条件。在单因素试验的基础上,采用响应面法对发酵条件中各因素进行优化。结果表明：最优发酵条件为牛肉膏4.6 g/L,氯化钠3.0 g/L,初始pH值为7.0,葡萄糖15 g/L,接种量6%,装液量50 mL/250 mL。在此优化条件下,抗菌物质的抑菌圈直径大小从未优化前的（14.55±0.43）mm提高至（34.99±0.14）mm,抑菌圈直径增加了140.48%。     

HPLC法检测黑曲霉发酵液中5-羟甲基糠醛的研究

该研究建立了一种利用高效液相色谱法测定黑曲霉（Aspergillus niger）xj发酵液中5-羟甲基糠醛（5-HMF）含量的检测方法。样品经乙醚提取,采用Spheriorb C18柱（4.6 mm×150 mm,5 μm）为色谱柱,以乙睛∶0.1%乙酸水（冰乙酸调）=10∶90（V/V）为流动相,柱温30 ℃;流速1.0 mL/min,检测波长为l=277 nm。在该色谱条件下,5-HMF呈现较好的分离效果和重现性,其含量与峰面积呈现良好线性关系（R为0.999）,保留时间2.436 min,回收率87.12%～90.78%,精密度实验结果相对标准偏差（RSD）0.71%。测得发酵液样品中5-HMF含量为0.125 7 mg/g。该方法准确可靠,重复性好,可对黑曲霉发酵液中5-HMF的含量测定作参考作用。