蛋清溶菌酶的提取及其酶学性质探究

采用阳离子交换法-超滤法协同分离提取蛋清中溶菌酶,首先通过单因素试验和Box-Behnken试验,优化蛋清中溶菌酶的提取工艺,然后对其酶学性质进行探究。结果表明:在树脂用量为蛋清滤液的24.2%,NaCl浓度1.00 mol/L,蛋清滤液pH 9.10,洗脱时间62.61 min时,溶菌酶经超滤离心后测得纯度为96.36%,比活力为23 718.61 U/mg。对所得溶菌酶酶学性质的研究表明:溶菌酶最适pH 7.0,在pH 4.0～7.0范围内稳定性较好,最适反应温度60℃,低温下热稳定性良好,在较高温度下酶活下降较快。Na~+和Ca~(2+)对酶有较强激活作用,K~+有一定激活作用,Mg~(2+)和Mn~(2+)对酶活影响不大,而Zn~(2+)对酶有明显抑制作用。甘油、Tween20、Tween40、Tween80等表面活性剂均对溶菌酶有抑制作用,其中甘油抑制效果最强。本研究结果对溶菌酶的工业化提纯和生产具有重要的意义。     

植物乳杆菌DMDL 9010培养基优化及其安全性评价

为将植物乳杆菌DMDL 9010进行商业化应用,通过Plackett-Burman试验和Box-Behnken试验对其进行培养基优化,并通过有害代谢产物试验、耐药性试验以及其它评价试验,确定该菌株为食用安全菌。研究结果表明:植物乳杆菌DMDL 9010培养基的最佳用量为:大豆多肽含量5 g/L、维生素C含量0.01%、硫酸锰含量0.1565 g/L时,此时植物乳杆菌DMDL 9010活菌数为4.05×10^10 CFU/mL,验证试验得3.88×10^10 CFU/mL,与理论值接近,通过安全性评价发现:有害代谢产物检测结果均为阴性;常见的4种抗生素中对四环素、链霉素表现为安全的中敏,对红霉素、氨基西林表现为安全的高敏且不含质粒;可抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌的增长且不产生溶血现象。本研究结果可为植物乳杆菌DMDL 9010在食品领域的商业化应用提供参考。     

植物乳杆菌DMDL 9010降解亚硝酸盐特性及其相关基因挖掘

笔者前期对植物乳杆菌DMDL 9010（Lactiplantibacillus plantarum DMDL 9010,LP9010）已进行全基因组测序,其NCBI登录号为CP063986-CP063988。该文通过研究LP9010在不同培养条件和培养基成分下的理化指标变化,结合全基因组序列初步分析LP9010降解亚硝酸盐的特性。结果表明,LP9010具有高效降解亚硝酸盐的能力,其亚硝酸盐降解率随着pH的降低而升高;温度为37 ℃有利于LP9010降解亚硝酸盐;LP9010在营养充分的条件下降解亚硝酸盐的效果最佳,且氧环境和生长因子对其无显著影响（p>0.05）。相应地,在LP9010全基因组中发现了酸耐受（nhaC、gadA、argG和glnR）、冷热耐受（cfa、cspA、hrcA、htpX、cplC、clpE、clpP、clpX和clpL）、氧耐受（catB、trxB、trxA、gor、msrC、msrA和msrB）以及糖转运（pstI、Crr、NagE、ScrA、MtlA、ManX、ManY、ManZ、GatA、GatB、GatC、FruA和FruB）相关的基因,尤其是发现了亚硝酸盐还原酶基因（lmrB和pgl）。总之,LP9010具有高效降解亚硝酸盐的能力和降解亚硝酸盐相关的基因。此结果为植物乳杆菌降解亚硝酸盐的机理提供了新的思路。     

凝结芽孢杆菌13002产芽孢条件优化

通过单因素实验及Box-Behnken响应面法优化凝结芽孢杆菌13002产芽孢的培养基配方与培养条件进行优化,以获得高芽孢数。结果表明:当培养基配方为葡萄糖15.0 g,细菌学蛋白胨10.0 g,酵母提取粉20.0 g,NaCl 10.0 g,MnSO₄ 0.2 g,K₂HPO₄ 3.0 g,并用10%的麸皮水浸提液定容至1 L;培养条件为初始pH7.0、接种量6%（V/V）、装液量30 mL （250 mL锥形瓶）、于200 r/min、40℃培养52 h时,获得的芽孢数可达3.31×109CFU/mL。本试验为工业化生产凝结芽孢杆菌13002制剂奠定基础。     

鼠李糖乳杆菌LR-ZB1107-01的安全性评价及其益生特性初步研究

从广州1月龄婴儿粪便中分离得一株乳酸菌,经鉴定为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus ZB1107-01),通过对该菌的溶血性、抗生素敏感性和动物经口急性毒理等安全性评价,并研究标准菌株与其对致病菌抑菌性、胃肠道液耐受性、肠道黏附性、疏水性和自聚力。结果表明:此菌无溶血性;对四环素、红霉素、氨基西林和卡那霉素等4种抗生素表现高敏感;小鼠经口急性毒理无毒,确定该菌株为食用安全菌。该菌可抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、单增李斯特菌的生长,抑菌效果与标准菌株ATCC7469相当。对人工模拟的胃肠道液有很好的耐受性,对pH2的人工胃液耐受性略强于标准菌株。黏附Caco-2细胞数与标准菌株相当。疏水性(48.6%)高于标准菌株(27.2%),自聚性与标准菌株相当。研究为鼠李糖乳杆菌LR-ZB1107-01在食品领域进行商业化应用提供理论依据。     

婴儿肠道源格氏乳杆菌的安全性评价及益生特性

以广州1?月龄婴儿肠道中分离出的乳酸杆菌为实验菌株，经分子生物学鉴定，确认为格氏乳杆菌（Lactobacillus gasseri）LGZ 1029。对格氏乳杆菌LGZ 1029进行体内外安全性评价和益生特性研究，结果表明：格氏乳杆菌LGZ?1029不产溶血毒素，对多类抗生素表现出敏感性，小鼠经口急性无毒；该菌具有较好的胃肠液耐受力及自凝聚能力，疏水性（79.75%）强于商业标准菌株鼠李糖乳杆菌ATCC?7469（43.01%）；菌株对大肠杆菌ATCC?25922抑菌圈直径为17.31～20.70?mm，对金黄色葡萄球菌ATCC?12598的抑菌圈直径为21.71～31.08?mm，抑菌效果强于鼠李糖乳杆菌ATCC?7469；活菌数为1×107?CFU/mL发酵液的1,1-苯基-2-三硝基苯肼自由基清除率可达87.07%。本实验为格氏乳杆菌LGZ?1029在膳食补充剂、乳品制造和防腐剂替代品领域的应用提供理论依据。     

植物乳杆菌DMDL9010冻干优化研究

以植物乳杆菌DMDL9010为研究对象,采用单因素实验并应用Box-Behnken设计对冻干保护剂配方进行优化,研究了该菌株在冻干过程中离心条件和冻干保护剂对冻干菌株存活率的影响。结果表明:在8 000 r/min离心30 min,菌泥活菌数可达最大值3.135×10~9mL~(-1);当冻干保护剂质量分数为:脱脂乳粉12.0%,细菌学蛋白胨7.95%,海藻糖15.2%时菌株存活率最高,经验证菌体数最高可达3.78×10~8g~(-1),冻干存活率达13.38%。