木霉LE02 β-1，3-葡聚糖酶酶学特性的研究

对木霉菌株LE02所产β-1,3-葡聚糖酶的酶学特性进行了研究。结果表明,该酶最适反应温度为55℃、最适反应pH值为5.0。Co~(2+)、K+、Zn~(2+)、Li~+、Ba~(2+)、Cu~(2+)以及1.0mmol/L的Fe~(2+)对该酶没有影响,Cd~(2+)和10.0mmol/L的Mg~(2+)对酶具有部分抑制作用,而低浓度的Hg~(2+)、5.0mmol/L以上的Mn~(2+)和10.0 mmol/L的Fe~(3+)能强烈抑制该酶的活性。该酶只能作用于β-1,3-糖苷键,以Larinami为底物时其米氏常数K_m值为128.34μg/mL,最大反应速度V_m为23.01μg/(min·mL)。经过SDS-PAGE测定的分子质量近似为80.137ku。     

转基因大米中氨基酸含量的超高效液相色谱定量

建立了一种6-氨基喹啉基--羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)柱前衍生,超高效液相色谱(UPLC)对大米中17种氨基酸进行快速定量的方法。优化了6 M盐酸和0.2%苯酚的加入量、水解时间等大米水解条件,采用1.7μm粒径的AccQ·Tag ULTRA C18色谱柱分离,260 nm检测,可在9.5 min内实现17种氨基酸衍生物的分离。结果表明,17种氨基酸的标准工作曲线的线性回归相关系数(r)均大于0.999,加标回收率在85.9%~102%之间,日内相对标准偏差(RSD)(n=5)2.64%~4.59%,日间相对标准偏差(n=3)1.43%~5.06%,方法简单、准确、快速、重复性和再现性良好。将该方法用于大米中氨基酸含量的分析,比较了4对转基因大米及其非转亲本之间氨基酸含量的差异,T检验结果表明,所取样分析的转基因大米及其亲本之间在氨基酸含量上没有显著性差异。     

核酸定量测量技术研究进展

生物学新的发展趋势是从定性科学转变为定量科学.核酸含量的定量测量技术对于食品安全(如转基因作物的核酸定量)、临床诊断(如病毒负荷量和用药指导)、法证科学(如死亡时间推断)、分子生物学基础科学研究(如细胞因子mRNA表达水平)等具有重要意义. 精确定量核酸含量或拷贝数是现代分析化学和分子生物学研究面临的重要挑战之一.计量是"实现单位统一、量值准确可靠的活动".建立核酸含量的精确测量方法,实现核酸定量结果的准确和溯源,是生物计量研究的重点之一.     

食品中低聚异麦芽糖高效液柑色谱检测方法研究

针对乳制品、固体饮料、糖果、保健品等食品中添加的功能活性成分低聚异麦芽糖,包括异麦芽糖(IG2)、潘糖(P)、异麦芽三糖(IG3)、异麦芽四糖(IG4)的检测,建立了水和乙腈为流动相,梯度洗脱,氨基色谱柱分离,蒸发光散射检测器(evaporative light-scattering detector,ELSD)检测食品中添加的低聚异麦芽糖舍量的高效波相色谱方法.异麦芽糖、潘糖、异麦芽三糖、异麦芽四糖的线性工作范围分别为0.1～0.45mg/mL、0.1～0.45mg/mL、0.2～0.65mg/mL、0.1～0.35mg/mL,线性相关系数R2分别为1、0.9999、0.9998、0.9999.对不同类型的食品,四种低聚异麦芽糖的回收率在98.0%～105.0%之间.方法准确度高.室内重复性变异系数一般都低于10%;除了含量低的异麦芽四糖,室间再现性变异系数一般都低于10%,说明方法的重复性和再现性良好.该方法简单、易于掌握,测定结果准确,适于复杂食品基质中低聚异麦芽糖含量的测定.     

腹泻性贝类毒素基体标准物质的研制

为了保证小鼠生物法、荧光衍生法、质谱法等对腹泻性贝类毒素检测结果的准确、可靠和可比,以紫贻贝为基体,采用添加法研制了一种含腹泻性贝类毒素软海绵酸(OA)的冻干粉形式的贝类毒素基体标准物质.采用LC-MS/MS法,以多家定值的方式对标准物质中的OA进行定值.均匀性检验结果表明该样品均匀,短期稳定性和6个月的稳定性考察表明样品稳定性良好.经过对影响定值结果的称样量、定容、校准物、校准曲线等因素的考察,进行不确定度评定,标准物质中OA的含量及不确定度为2.96土0.50μgOA/g(k=2).该标准物质可以用于腹泻性贝类毒素检测过程的方法验证与质量控制等.     

食品中低聚果糖高效液相色谱检测方法研究

针对乳制品、糕点、酒类、饮料、糖果等食品中添加的功能活性成分低聚果糖,包括蔗果三糖(GF2)、蔗果四糖(GF3)、蔗果五糖(GF4)的检测,建立了水和乙腈为流动相,梯度洗脱,氨基色谱柱分离,蒸发光散射检测器(evaporativelight-scattering detector,ELSD)检测食品中添加的低聚果糖含量的高效液相色谱方法。蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖的线性工作范围分别为0·04~0·45、0·05~0·50、0·04~0·45mg/mL,线性相关系数R2分别为0·9999、0·9999、1。对不同类型的食品,三种低聚果糖的回收率在90·0%~110·0%之间,方法准确度高。室内重复性变异系数一般都低于10%,室间再现性变异系数一般都低于15%,说明方法的重复性和再现性良好。该方法简单、易于掌握,测定结果准确,适于复杂食品基质中低聚果糖含量的测定。     

自溶-酶-碱法提取啤酒酵母中β-1,3-葡聚糖的工艺研究

本文通过正交试验,对自溶-酶-碱法提取废啤酒酵母中β-1,3-葡聚糖的最佳工艺进行了研究.结果表明其最佳工艺条件为:啤酒酵母于50℃自溶6h后,添加100U/湿酵母木瓜蛋白酶,继续自溶18h后离心,沉淀用2%的NaOH溶液分散,于80℃水浴处理3h后离心,沉淀用蒸馏水清洗3～4次后进行真空冷冻干燥,粉碎得成品.成品得率10.80%,其中多糖含量87.70%、蛋白质含量0.45%、水分含量6.72%、灰分含量1.05%,具有得率高、纯度高、蛋白质含量低的特点.