白藜芦醇对内质网应激介导的原代神经元细胞作用机制

目的：探讨白藜芦醇（resveratrol,Res）对衣霉素（tunicamycin,TM）诱导内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）模型的神经保护作用及其作用机制。方法：取怀孕18 d孕鼠分离的胎鼠海马神经元进行原代培养,设置对照组（不作处理）、TM组（质量浓度2.5 μg/mL）、Res组（5 μmol/L）和Res＋TM组（5 μmol/L Res预处理＋质量浓度2.5 μg/mL TM进一步共处理）,采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK8）检测海马神经元存活率并筛选TM和Res最佳作用浓度和时间;利用流式细胞仪分别检测原代神经元凋亡水平和周期状态,通过Western blot分析细胞ERS、自噬、凋亡和周期的相关蛋白变化。结果：5 μmol/L Res预处理10 h后能减轻TM对原代神经元细胞存活率的抑制作用,使神经元细胞周期重激活,促使其由G1/G0期向S期进行。与TM组相比,Res预处理10 h组（R10T组）的葡萄糖调节蛋白78（glucose regulated protein 78,GRP78）、Caspase 3相对表达量极显著或显著降低（P＜0.01、P＜0.05）,而自噬相关蛋白Beclin-1、微管结合蛋白1轻链3（microtubule-associated protein1 light chain 3,LC3）B相对表达量显著升高（P＜0.05）,磷酸化糖原合成酶激酶3β（phosphorylated glycogen synthase kinase 3β,p-GSK3β）、凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma 2,Bcl2）蛋白相对表达量高度显著或极显著升高（P＜0.001、P＜0.01）,抑制TM引起的细胞凋亡。结论：Res可以减轻TM引起的原代神经元ERS,对原代神经元起到保护作用,其作用机制与Res对细胞存活率、周期分布和自噬、凋亡相关蛋白表达调节有关。     

玉米黄素对衣霉素诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

研究玉米黄素对衣霉素诱导损伤的神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）的保护作用。实验分为空白组、损伤组（模型组）、2、5、10 μmol/L玉米黄素保护组。用衣霉素（tunicamycin,TM）建立SH-SY5Y细胞损伤模型,噻唑蓝测定细胞存活率,试剂盒法测定培养液中的乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）水平。结果显示：TM质量浓度在2 μg/mL以上时,可显著降低SH-SY5Y细胞活性（P＜0.01）;与TM损伤组相比,2～10 μmol/L玉米黄素预处理可显著提高细胞存活率（P＜0.05）,降低LDH的释放率,先用TM处理30 min后再加2、5、10 μmol/L的玉米黄素处理24 h的玉米黄素后处理组结果相同。因此,TM通过诱导内质网应激可引起细胞损伤,玉米黄素能够减轻该损伤作用,并且在一定程度上可逆转TM引起的损伤。     

婴幼儿乳品中叶酸的微生物测定方法

按照GB 5413.16-2010、GB/T 5009.211-2008及Biostest叶酸检测试剂盒等不同方法,对同一乳制品样品叶酸含量进行测定,同时进行加标回收试验。结果表明,依据GB 5413.16-2010,在制备标准测试管时,使用两种浓度的含抗坏血酸的磷酸缓冲液稀释获得的叶酸标准工作液,同时样品测试液也由抗坏血酸的磷酸缓冲液稀释获得,测得叶酸质量分数为40.45μg/hg,回收率为71%。而参照GB/T 5009.211-2008,只使用一种浓度的用水稀释获得的叶酸标准工作液,同时样品测试液也由水稀释获得,测得同一样品的叶酸质量分数为70.5μg/hg,回收率为92.6%。使用Biostest叶酸检测试剂盒测得同一样品的叶酸质量分数为73.71μg/hg,回收率为99%。不采用含抗坏血酸的磷酸缓冲液而是用水稀释获得标准工作液和样品测试液,测试婴幼儿乳制品叶酸含量,加标回收率较高,测试结果可以接受。     

益生菌类保健食品中双歧杆菌计数不确定度的评定

依据《食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验》(GB 4789.35-2016),益生菌类保健食品中的双歧杆菌计数的样品稀释和加样过程中,既可以使用1 mL无菌吸量管也可以使用微量移液器。本研究的目是比较两种量具对双歧杆菌计数的测量不确定度产生的影响。根据中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布的《测量不确定度评定与表示》(JJF 1059.1-2012),对益生菌类保健食品中双歧杆菌计数的测量不确定度进行评定。不确定度评定主要从影响较大的样品制备、样品稀释、加样和重复检测等几方面进行,样品的双歧杆菌计数过程中样品稀释和加样时分别使用1 mL无菌吸量管和微量移液器。当包含率在95%时,使用吸量管进行稀释和加样时,样品中双歧杆菌计数检测结果的扩展不确定度U为0.28,样品双歧杆菌数的对数值区间为9.35～9.91,样品中双歧杆菌数的置信区间为(2.2～8.1)×10~9CFU/g。以移液器作为稀释和加样量具,扩展不确定度U为0.36,样品中双歧杆菌数的对数值区间为9.43～10.15,样品双歧杆菌数的置信区间为(2.7～14)×10~9CFU/g。益生菌类保健食品中双歧杆菌的数量较大,稀释倍数大,因此样品稀释引入的不确定度均较大,约占90%。样品稀释和加样过程中使用吸量管与使用移液器相比,使用吸量管带入的不确定度均略小,而使用吸量管对A类不确定度的影响比使用移液器略大。使用吸量管双歧杆菌计数检测结果的扩展不确定度略低。另外,使用两种量具对同一益生菌类保健食品中双歧杆菌进行计数,结果差异显著。     

白藜芦醇诱导Raji细胞死亡的自噬途径

目的探讨白藜芦醇对Burkitt B淋巴瘤Raji细胞的增殖抑制作用及诱导死亡途径。方法用白藜芦醇处理Raji细胞,透射电镜及MDC染色检测细胞死亡;Western blot法检测Caspase-3、细胞色素c及CathepsinD蛋白的表达。结果白藜芦醇可明显抑制Raji细胞增殖,电镜观察细胞内出现了大量的自噬小泡,MDC染色后细胞点块状荧光结构明显增加。Western blot分析显示,白藜芦醇可引起细胞色素c从线粒体释放,但释放量与Jurkat细胞相比明显减少,且不能导致Caspase-3的活化。Cathepsin D活性成分32kD片段随白藜芦醇处理时间的延长而减少。结论白藜芦醇可抑制Raji细胞增殖,并通过Caspase非依赖途径诱导细胞自噬死亡。     

玉米黄素对内质网应激引发的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的:研究玉米黄素对内质网应激引起的细胞凋亡的保护作用。试验分为空白对照组、衣霉素(TM)损伤组(5 μg/mL)、玉米黄素保护组(5 μmol/L)和损伤加保护组。采用Caspase 3试剂盒检测Caspase 3活性的变化;采用Western Blot法测定凋亡相关蛋白PERK、CHOP,PERK下游信号分子elF2α和ATF4,以及自噬相关蛋白Beclin 1。结果显示:与TM模型组相比,玉米黄素处理后PERK及其下游调控蛋白elF2α和ATF4的表达能力显著下降(P<0.01),Beclin 1的水平显著升高(P<0.01)。与未加自噬抑制剂相比,玉米黄素组的GRP78水平显著升高(P<0.01)。与对照组相比,TM模型组的CHOP蛋白的表达水平极显著升高(P<0.01),而玉米黄素处理组CHOP蛋白的表达水平极显著低于TM模型组(P<0.01)。结论:玉米黄素能减轻由内质网应激引起的损伤作用,并且可逆转TM引起的损伤。其作用机制是:玉米黄素通过抑制PERK通路,进而抑制GRP78与ERS感受器的分离,降低促凋亡因子CHOP的水平,通过调控保护性自噬来缓解ERS。     

阿尔茨海默病中β淀粉样蛋白作用机制的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一种常见的中枢神经系统退行性病变,老年人是高发人群,严重影响老年人的健康及生活质量。AD患者脑内形成神经炎性淀粉斑,即老年斑(senile plaque,SP)是其病理特征之一,SP主要由细胞外的β淀粉样蛋白(Amyloid-β,Aβ)沉积而成。Aβ是一个具有β片层的二级结构多肽,由淀粉样前体蛋白(APP)经水解产生后在脑内聚集,引发相应的神经毒性,造成神经元死亡,从而导致AD的发生和发展。Aβ在AD发病过程中起着重要作用,但其具体作用机制尚未明确。本文就近年来对Aβ的产生、分布与清除、传递与运输的研究进展作一综述。     

微生物法测定婴幼儿配方食品中生物素的不确定度评估

按照食品安全国家标准GB 5009.259-2016规定的微生物法对婴幼儿配方食品中生物素含量进行测定,根据CNAS-CL07:2011要求并依据JJF1059.1-2012和GB/Z22553-2010对测定过程影响检验结果的各个分量进行评估,即对测量重复性,试样称量及稀释,标准溶液配制,标准曲线拟合及紫外-可见光分光光度计测量偏差5个方面引入的不确定度进行分析,并确定了各不确定度分量,得出扩展不确定度。经测定,婴幼儿谷粉中生物素含量为(32.49±2.64)μg/100 g,P=95%,k=2。微生物因素对测量不确定度影响显著,由标准曲线拟合和重复测量体现。     

玉米黄素对衣霉素诱导的SH-SY5Y细胞周期、自噬、凋亡的保护作用

目的：探讨玉米黄素对衣霉素（tunicamycin,TM）诱导的SH-SY5Y细胞活性、细胞周期、自噬及凋亡的影响。方法：分别设置空白对照组（不作处理）、玉米黄素组（5 μmol/L玉米黄素）、TM损伤组（5 μg/mL TM）和损伤加保护组（5 μmol/L玉米黄素预处理＋5 μg/mL TM进一步共处理）,采用噻唑蓝法检测各处理对SH-SY5Y细胞存活率的影响,从而筛选药物共处理时间;采用流式细胞术测定细胞周期的变化;通过Western blot法测定自噬相关蛋白Beclin1、Beclin1-C和微管结合蛋白1轻链3（microtubule-associated protein1 light chain 3,LC3）B以及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma 2,BCL2）的表达量。结果：玉米黄素（5 μmol/L）能减轻TM对SH-SY5Y细胞存活率的抑制作用,与TM损伤组相比,损伤加保护组在处理时间为36 h时差异极显著（P＜0.01）,48 h时差异显著（P＜0.05）;而TM损伤组相较于空白对照组在处理24、36、48 h时均表现出极显著差异（P＜0.01）。与空白对照组相比,TM处理可以极显著增加细胞周期中G0/G1期细胞数量（P＜0.01）,显著或极显著增加LC3B（P＜0.01）、Beclin1（P＜0.05）及Beclin1-C（P＜0.05）表达水平,极显著降低G2/M期细胞数量（P＜0.01）、抗凋亡蛋白BCL2表达水平（P＜0.01）。而玉米黄素联合TM处理与TM损伤组比较,均能减轻TM引起的改变,其中BCL2蛋白水平显著提高（P＜0.05）。结论：玉米黄素可减轻TM处理引起的SH-SY5Y细胞周期G1期阻滞、促细胞自噬与促凋亡作用,其作用机制与玉米黄素对细胞存活率、细胞周期分布和自噬、凋亡相关蛋白表达的调节有关。