Illumina MiSeq高通量测序技术研究原料乳及环境中细菌多样性和致病菌的分布情况

利用Illumina MiSeq高通量测序方法测定原料乳及其环境中的细菌微生物的多样性及致病菌的分布情况。提取DNA和PCR扩增后测序,主要测定稀释性曲线、OTU相对丰度曲线以及菌群分布图。结果表明:菌群具有多样性,在输乳管路外侧和盛装原料奶的空贮罐中均检测出金黄色葡萄球菌。应严格监控奶牛生活环境及储奶设施的卫生情况,从而保障原料乳质量安全。     

利用Illumina MiSeq高通量测序技术分析原料乳的菌群分布

为测定原料乳中的菌群分布情况,应用Illumina MiSeq高通量测序方法,主要对14?个奶牛场的原料乳进行采集,通过DNA测序确定菌群的多样性及致病菌的分布情况,进行操作分类单元聚类分析、Alpha多样性分析、物种分类分析3?方面的测定。结果表明不同牧场的菌群存在多样性,位于前列的分别是肠球菌属（Enterococcus）、芽孢杆菌属（Bacillus）、不动杆菌属（Acinetobacter）、乳球菌属（Lactococcus）,同时表明,个别牛场原料乳中有金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和志贺菌（Shigella）的存在。     

高效液相色谱法检测乳中β-内酰胺酶抑制剂——克拉维酸

建立了乳中β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸的检测方法。样品采用乙腈除蛋白,正己烷脱脂的方法。色谱条件:Hypersil ODS-2 C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为0.025 mol/L磷酸二氢钾(pH 4.5)-甲醇溶液(95∶5,V∶V),检测波长217 nm,流速1 mL/min。试验结果表明:克拉维酸在5~200μg/mL质量浓度范围具有良好的线性关系,相关系数为0.9992。采用空白基质匹配标准溶液的方法进行标准校正,克拉维酸的平均回收率在83%~92%之间,相对标准偏差小于1.185%。该方法具有操作简单,灵敏度高,结果准确等特点,适用于乳中β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸的检测。