蚯蚓抗菌肽的提取与抗菌活性研究

用30%～80%不同浓度硫酸铵沉淀蚯蚓蛋白,用考马斯亮蓝测定蛋白含量,采用管磲法和微量稀释方法分别测定蚯蚓抗菌肽和苯甲酸钠在pH值分别是4.0、7.0、9.0下的抑菌活性及最小抑菌浓度(MIC).结果显示40%、50%、60%、70%硫酸铵沉淀出的蛋白都表现出抗菌活性,并对G (金黄色葡萄球菌)和G-(大肠杆菌)均有抑菌性.同时证实蚯蚓抗菌肽抗菌性受pH影响不大.     

一株杀线虫活性海洋真菌BH-0531的培养特性及种属鉴定

从渤海湾底水中分离得到的一株具有杀线虫活性海洋真菌BH-0531,考察该菌株的培养特性并进行种属鉴定。结果表明,菌株BH-0531最适海水浓度为20%,最适培养基为20%海水琼脂培养基,最适氮源为硝酸钠,最适pH值为6～7,最适温度为26 ℃。根据菌株BH-0531的形态学观察结果和5.8S rDNA-ITS序列对比发现,菌株BH-0531与Acremonium potronii isolate 35（JX535064.1）高度同源（100%）,被鉴定为波氏枝顶孢霉（A. potronii）的海栖型变种：Acremonium potronii var. marine BH-0531。     

海洋枝顶孢霉BH0531发酵液杀线虫组分的分离及活性测定

实验采用生物活性跟踪法,通过超滤、Sephadex凝胶层析、离子交换树脂、硅胶板薄层层析,以及特异性鉴别染色等方法对海洋枝顶孢霉BH0531发酵液的杀线虫活性组分进行分级分离和初步的性质分析。结果表明,Sephadex凝胶柱层析（G-25,G-10）可有效分离获得杀线虫活性组分,3 d的线虫校正死亡率达98.33%;以正丁醇:水:无水乙醇=1∶1∶1(V/V)为展开剂的薄层层析,可将活性组分有效分离,Rf = 0.31,斑点洗脱物的线虫校正死亡率达到94.00%;定性染色结果显示,茚三酮反应阳性,证实有α-氨基存在,茚三酮吡啶呈红色,显现出寡肽性质;双甲酮染色呈亮黄色,表明具有酮糖性质。结果表明,BH0531杀线虫活性代谢物应为含有酮糖基团的短肽类化合物。     

菌株Sr18杀线虫代谢物的规模发酵及杀线效果研究

实验以菌株Sr18（Syncephalastrum racemosum）为发酵对象,以杀线虫活性为考察指标,在5 L、30 L发酵研究基础上,进行了200 L和5 t发酵罐水平上的规模发酵实验。结果显示,200 L罐发酵工艺参数为接种量4%,发酵温度26 ℃,罐压0.05～0.12 MPa,空气流量4～9 m3/h,转速120～198 r/min,发酵周期48 h;5 t罐发酵参数为接种量4%,发酵温度26 ℃,罐压0.03 MPa,空气流量65～80 m3/h,转速80～90 r/min,发酵周期40 h。在此发酵条件下,200 L和5 t罐的1倍稀释发酵液的杀线虫活性均可达到100%,表明实验所设定的发酵参数适用、可控。     

一株产几丁质酶渤海丝状真菌（Alternariatenuissima）的筛选及鉴定

以渤海湾水域获得的52株丝状海洋真菌为出发菌株,通过平板透明圈法和发酵液酶活性测定,从中筛选出一株产几丁质酶活力较高的海洋真菌mTJ04-1．1,结合形态学方法和18SrDNA．ITS序列分析对其进行鉴定,确定该菌为极细链格孢霉（AltemariatenuissimamTJ04-1-1）。该菌能在以几丁质为唯一碳源的平板上生长并产生明显透明圈,透明圈与菌落直径的比值（D／d）达N2．81。对发酵液几丁质酶活力分析结果表明,该酶最适反应温度为45℃,最适pH值为6．5,最适条件下酶活性可达3．2U／mL。     

海洋枝顶孢霉BH0531发酵液对根结线虫卵及二龄幼虫的影响

实验以根结线虫的卵、卵囊和二龄幼虫（J2）为研究对象,对海洋枝顶孢霉（Acremonium sp.）BH0531发酵液处理根结线虫不同发育阶段的杀线作用进行了效果评价,并以J2幼虫为靶标,与市面上的灭线磷及阿维菌素的药效进行了初步对比。结果显示,在实验条件下,海洋枝顶孢霉BH0531发酵液对根结线虫卵囊和分散卵的孵化以及J2幼虫的活力均具有明显抑制作用,其对卵囊孵化的抑制作用达40.18%;对分散卵孵化的抑制作用可达84.28%;而对J2幼虫的杀线作用最为显著,校正死亡率高达97.41%,高于实验条件下灭线磷及阿维菌素的测定值,在根结线虫的生物防控方面显现出潜在的研究价值。     

抗白色念珠菌海洋真菌的筛选及抑菌活性初探

实验以白色念珠菌为对象,对从渤海湾不同站位分离获得的55株海洋丝状真菌进行了抗真菌活性菌株的筛选。从中筛选得到了BH431、BH515、BH531和BH09721 4株抑菌活性较高的菌株,并进一步对不同浓度发酵液的抑菌活性及代谢物性质进行了检测。结果显示,4株海洋真菌对野生型白色念珠菌SC5314均具有较强抑菌活性,其最小抑菌浓度分别为 65 g/mL、19 g/mL、54 g/mL、23 g/mL;其中BH431和BH515菌株还显示出对基因敲除型菌株RM1000的抑菌活性,最小抑菌浓度分别为 32 g/mL、39 g/mL。4株海洋真菌所产生的活性代谢物具有较好的酸碱适应性,活性物质分子质量＜6 000 u;其中BH431菌株的活性代谢物还具有良好的热稳定性。     

海洋真菌BH0531对黄瓜促生长作用的研究

通过室内盆栽试验研究了海洋枝顶孢霉（Acremonium sp.）BH0531次生代谢产物对黄瓜根结线虫病的防治效果及对黄瓜植株生长的促进作用。实验以根结线虫（Meloidogyne incognita）侵染后的黄瓜为材料,在土壤中加入质量浓度为5 mg/mL、10 mg/mL、20 mg/mL、40 mg/mL菌株BH0531发酵液40 mL,用等体积清水作为对照,测定黄瓜的株高、茎粗、叶片的可溶性蛋白及可溶性糖含量、叶绿素含量和根系活力。结果表明,在试验浓度范围内施入发酵液,对根结线虫病的防效最高达72.7%,同时施入发酵液显著增加叶片可溶性糖和叶绿素含量,提高黄瓜的根系活力。因此,海洋枝顶孢霉BH0531的代谢物不仅对黄瓜根结线虫病有显著的控制效果,而且对黄瓜生长有一定的促进作用。     

海洋枝顶孢霉BH0531代谢物对松材线虫形态和酶活的影响

使用海洋枝顶孢霉（Acremoniumsp.BH0531）活性代谢物处理松材线虫,通过线虫的形态、运动和酶活的变化对BH0531杀线虫机理进行初步探讨。结果表明,经BH0531代谢物处理后的线虫虫体严重扭曲,扭动频率显著提升,并随时间推移而趋缓,最终呈C形、新月形或直形死亡。酶活性测试表明,该菌代谢物对松材线虫体内的乙酰胆碱酯酶AChE具较强抑制作用,酶比活力由0.417 U/mg降至0.089 U/mg;ATP酶活力先升高后下降,处理2h酶比活力由0.447U/mg升至0.501U/mg,随着时间的持续又急剧下降至0.18 U/mg左右。这两种酶活力的变化情况与线虫处理后运动频率变化的观察结果相一致。     

虫源性细菌纤维素酶发酵条件的均匀优化研究

采用U15·(157)均匀试验对虫源性的蜡状芽孢杆菌产纤维素酶发酵条件进行逐步回归分析:以DNS法测定酶活力,确定了该菌株的最优产酶条件.试验结果表明,在自然供氧条件下,发酵74h时酶活性最高;蛋白胨对纤维素酶活力有促进作用.最佳组合条件为:在100mL三角瓶中装入20mL液体培养基,初始pH值为7.5,0.5%CMC-Na,1.2%蛋白胨,最大酶活为233.4711μg/(mL·min).进一步的酶学特性研究显示,酶促反应的最适pH值为8.5,最适温度为25℃～60℃,范围内酶活可保持60%以上.