凝结芽孢杆菌中耐热木酮糖激酶基因的克隆表达及生信分析

该研究以凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans）IPE22为研究对象,通过聚合酶链式反应（PCR）扩增获得木酮糖激酶基因Bc-XK,将其与载体pET-30a连接后,在大肠杆菌（Escherichia coli）BL21(DE3)中进行诱导表达。然后采用镍柱亲和层析纯化重组酶Bc-XK,对基因Bc-XK及其编码的蛋白质进行生信分析。结果表明,纯化后重组酶Bc-XK的酶比活力为（20.56±3.31） U/mg,热稳定性好,在60 ℃保持活力180 min以上,具有很好的工业应用潜力。Bc-XK基因含有一个1 536 bp的开放阅读框,共编码511个氨基酸,其编码的蛋白质为亲水蛋白,等电点（PI）为5.46,分子质量为56.15 kDa,二级结构中α-螺旋、无规卷曲和延伸链含量丰富,3个催化位点分别为天冬氨酸-8、苏氨酸-11、天冬氨酸-239,高度保守。