花生球蛋白鼠源多克隆抗体的制备及免疫学特性鉴定

为建立花生球蛋白致敏原的免疫学快速检测方法,采用碱溶酸沉法提取花生球蛋白,经SDS-PAGE检测蛋白纯度后,免疫5只6～8周龄的Balb/c雌性小鼠制备花生球蛋白鼠源多克隆抗体(多抗)血清,并进行免疫学特性鉴定。结果表明：免疫结束后得到的5个多抗血清效价均在1∶51 200以上,均具有一定的敏感性,其中2号小鼠的多抗血清敏感性较好,半数抑制浓度为320 ng/mL;制备的多抗血清特异性较强,2号小鼠的多抗血清与伴花生球蛋白、大豆球蛋白、β-伴大豆球蛋白、牛血清白蛋白、麦朊蛋白、乳清蛋白的交叉反应率均较低,在0.5%以下;Western blot鉴定结果表明成功制备出了花生球蛋白鼠源多克隆抗体。综上,获得了效价高、敏感性强、特异性优良的花生球蛋白鼠源多克隆抗体,为其单克隆抗体的制备及免疫学快速检测方法研究奠定了基础。     

热处理大豆球蛋白的体外消化稳定性

为了有效评估大豆球蛋白抗原性变化,对热处理后的大豆球蛋白进行体外模拟消化实验,考察其体外消化稳定性。首先采用碱溶酸沉法从脱脂大豆粉中提取大豆球蛋白,然后将其经400 MPa超高静压处理15 min后进行加热(70、90、110、130℃)处理20 min,然后进行体外模拟消化实验,采用SDS-PAGE、邻苯二甲醛(OPA)法和间接竞争酶联免疫(ELISA)法研究消化过程中大豆球蛋白的蛋白质分子质量、水解度和抗原性的变化。结果表明：经体外模拟消化实验后,与未处理样品相比,不同温度热处理后大豆球蛋白的蛋白质条带逐渐变浅,生成更多的小分子蛋白;在胃消化过程中,未处理和热处理大豆球蛋白的水解度逐渐增强,在肠消化过程中,经过90、110、130℃热处理的大豆球蛋白水解度总体先增加后降低;与未处理的大豆球蛋白相比,热处理大豆球蛋白经过胃肠消化后抗原抑制率显著下降,最低可从87%降至4%。大豆球蛋白经过热处理,通过胃肠消化后可显著降低其抗原性。     

花生致敏蛋白Ara h 3单克隆抗体的制备及其免疫学特性鉴定

以Ara h 3为免疫原免疫小鼠。选取血清效价高的小鼠再次免疫，制备出脾细胞后与骨髓瘤细胞一起进行细胞融合，得到杂交瘤细胞株，筛选阳性株制备大量单克隆抗体。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)对制备的单克隆抗体进行效价测定、敏感性测定和特异性测定。通过蛋白质免疫印迹试验进一步验证其特异性。结果表明：免疫性较好的4B2单克隆抗体经纯化后的效价为1∶5.12×10⁵。由敏感性测定得知4B2单克隆抗体的半抑制浓度(IC₅₀)为389 ng/mL,证明其具有较好的敏感性，交叉反应率小于0.5%,成功制备出纯度高、效价高、敏感性好、特异性强的Ara h 3鼠源单克隆抗体，为建立免疫学快速检测方法奠定了基础。