核桃球蛋白的分离纯化、鉴定及抗氧化性分析

为揭示核桃球蛋白主要组成及体外抗氧化活性,以脱脂核桃粕为原料,对其中的球蛋白进行分离纯化并通过2,2'-联氮双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）（2,2'-azino-bis（3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid）,ABTS）阳离子自由基清除能力对其抗氧化能力进行评价,即经进一步脱脂后,根据Osborne分级法提取得到核桃球蛋白粗提物,再通过HiTrapTM CaptoTM Q阴离子交换柱和SephacrylTM S 100HR凝胶过滤柱两步分离纯化,得到主要蛋白组分。结果表明,制备的球蛋白蛋白含量为51.53%,占核桃总蛋白的15.3%,等电点为3.8。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示,纯化得到主要蛋白组分分子量为10.1 kDa。经高效液相色谱-质谱联用分析表明,该主要蛋白组分在活性状态下由一种7S球蛋白vicilin Car i 2.0101和2S清蛋白组成。研究发现,球蛋白粗提物和纯化蛋白组分均对ABTS+自由基有较好的清除能力,其IC₅₀值分别为0.302和0.075 mg/mL,表明纯化蛋白组分的清除能力提高了4倍以上。研究结果可为核桃球蛋白开发利用提供理论基础。