2018—2020年高邮市小肠结肠炎耶尔森菌流行病学及病原学特征分析

目的 了解高邮市小肠结肠炎耶尔森菌流行病学及病原学特征,为本地区该菌的防控提供科学依据。方法 2018-2020年在高邮市采集腹泻患者粪便、家畜家禽粪便、苍蝇及生猪屠宰场组织样本等各类样本共计2682份。采用冷增菌方法进行小肠结肠炎耶尔森菌的分离培养,对分离菌株进行生化鉴定、血清分型、生物分型和毒力基因的荧光PCR检测。结果 2682份样本中共检出小肠结肠炎耶尔森菌120株,检出率为4.47%,包括猪粪源菌株99株,鸭粪源菌株2株,苍蝇源菌株4株,生猪屠宰场源菌株15株。分离菌株血清型以O:3型为主,生物型主要为3型,毒力基因检测结果显示,具有致病性的分离菌株共73株,其中O:3血清型69株、O:9血清型1株和血清未定型3株,且以猪粪源菌株为主。结论 小肠结肠炎耶尔森菌在高邮市畜禽动物、苍蝇媒介及生猪屠宰场中存在流行分布,猪的检出率最高,且致病性菌株携带率最高,主要致病型别为生物3型/ O:3血清型（3/ O:3型）。     

重组酶介导的等温扩增技术联合CRISPR-Cas13a快速检测4种腹泻病原菌

目的重组酶介导的等温扩增技术(RAA)联合规律间隔性成簇短回文重复序列相关Cas13a蛋白(CRISPR-Cas13a),建立对沙门菌、志贺菌、霍乱弧菌、肠出血性大肠杆菌O157:H7 4种腹泻病原菌的快速分子检测方法,即RAA-Cas13a。方法 设计4种腹泻病原菌的RAA特异性引物和CRISPR RNA(crRNA),利用RAA技术扩增样本核酸,并进行CRISPR-Cas13a恒温荧光检测,以实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)为对照方法,评价RAA-Cas13a优化方法的灵敏度与特异性。结果 RAA-Cas13a方法可在35 min内完成检测。检测志贺菌、霍乱弧菌、肠出血性大肠杆菌O157:H7的最低检测限为10 copies/μL,沙门菌最低检测限为1 copy/μL;特异性实验表明每一种病原菌与其余10种对照细菌均无交叉反应。应用建立的方法检测200份实际样本和40份人工污染样本,结果表明同RT-qPCR检测结果一致性高(分别为Kappa=0.927和Kappa=1.000)。结论 RAA-Cas13a检测方法具有灵敏度高,特异性强等优点,能用于4种腹泻病原菌的快速检...