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目的:为研究食品污染中沙门氏菌间的同源性关系,建立起沙门氏菌基于重复序列的分型技术。通过建立DiversiLab基因图谱数据库,以便对将来不同来源的沙门氏菌的基因图谱进行即时比较,确定其同源性,进而追溯污染来源,切断传播途径,为预测预警保障食品安全提供科学依据,为防止食源性疾病的发生提供技术支持。同时进行血清分型,比较分析2种方法的优劣和之间的关系。方法:对2002~2010年福建省出入境检验检疫局从各类食品及饲料中分离出的沙门氏菌先进行血清分型,然后进行DiversiLab分型,其中包括:DNA提取,rep-PCR和微电泳芯片分离检测。rep-PCR条件:94℃预变性2min;94℃变性30s,50℃退火30s,70℃延伸90s,35个循环,最后70℃延伸3min。结果:23株沙门氏菌被分成6个血清型,DiversiLab分型能将相同血清型的菌株分为不同的亚型。同一企业来源的菌株具有同源性。结论:DiversiLab分型系统是一种快速、易于操作、高重复性、高分辨率的基因分型方法,可作为食源性疾病同源性分型工具。结论:DiversiLab分型的分辨率高于血清型,2种分型方法密切相关。 相似文献
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为研究奶制品污染中阪崎肠杆菌的同源性关系,并建立起阪崎肠杆菌基于重复序列的分型技术。对2005-2006年福建省出入境检验检疫局从各类奶制品中分离出的阪崎肠杆菌先进行API鉴定,然后进行DiversiLab分型。其中DiversiLab分型包括:DNA提取,rep-PCR和微电泳芯片分离检测。rep-PCR条件为:94℃预变性2 min;94℃变性30 s,55℃退火30 s,70℃延伸90 s,35个循环;最后70℃延伸3 min。结果表明:31株阪崎肠杆菌被API分成了5种不同的生物型,DiversiLab分型能将阪崎肠杆菌分为不同的亚型,但它们之间没有必然的联系。部分同一企业来源的菌株具有同源性,样品的同源性与采样地无关。DiversiLab分型系统是一种快速,高效,易于操作,高重复性,高分辨率的基因分型方法,可作为食源性污染的同源性分型工具。 相似文献
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目的:研究从同一类食品中分离出的单增李斯特菌间的同源性关系,为预测预警保障食品安全和食源性疾病溯源提供科学依据和技术支持。方法:应用DiversiLab分型系统对2001-2010年福建出入境检验检疫局从各类禽肉制品中分离出的25 株单增李斯特菌进行分型,其中包括:DNA提取、重复序列-聚合酶链式反应(repetitivesequence-based polymerase chain reaction,rep-PCR)、微电泳芯片分离检测及数据分析。结果:DiversiLab分型中,相似系数为95%时,25 株菌被分为了6 组(G);相似系数为97%时,25 株菌被分为11 组(P)。结论:DiversiLab分型结果较准确地揭示了25 株菌株间的亲缘性关系。基于rep-PCR的DiversiLab分型系统,是一种操作简单、分辨率高、重复性好且高效快速的基因分型方法,可作为食源性病原体检测及食源性疾病溯源的工具。 相似文献
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环介导等温扩增技术快速检测食品中的单增李斯特氏菌 总被引:3,自引:0,他引:3
采用环介导等温扩增(1oop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术检测食品中的单增李斯特氏菌,并做特异性、敏感性和适用性试验。试验结果显示以单增李斯特氏菌hly基因保守区设计特异性引物,进行DNA等温扩增是可行的。3株单增李斯特氏菌均扩增出特异性目的片段,而10株非单增李斯特氏菌均未产生目的片段。用环介导等温扩增法在65℃条件下,1h内可检出单增李斯特氏菌,其灵敏度达100cfu/mL,特异性为100%,无假阳性和假阴性出现。用该方法与国标方法分别检测50种样品中的单增李斯特氏菌,结果数据显示两种方法的符合率达100%,表明环介导等温扩增法具有高效、特异性强和敏感性高等特点,可满足大批量样品快速筛选的要求。 相似文献
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建立乳粉中阪崎肠杆菌标准物质的制备方法.对阪崎肠杆菌真空冷冻干燥过程中使用的三种保护剂进行比较,筛选出效果最好的奶液(即脱脂奶粉与无菌水的比例为1∶4)作为保护剂,用于冷冻干燥时提高阪崎肠杆菌活菌存活率.在奶液中添加一定浓度的阪崎肠杆菌,使用真空冷冻干燥技术制备成冻干奶粉样品,测其含菌量,根据测得的菌落数量,按比例加入脱脂奶粉混匀稀释成平板菌落计数为10~15 g-1的标准样品,经真空包装获得2批共300个独立包装的冻干阪崎肠杆菌标准样品(10g/包).经过均匀性与稳定性检验,样品的定值及不确定度评估.结果表明:该标准物质均匀性、稳定性良好,该方法对进一步完善微生物尤其是致病菌标准物质的制备具有参考价值. 相似文献
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沙门氏菌DNA提取及PCR反应条件的优化 总被引:3,自引:1,他引:3
分别采用煮沸法和CTAB/NaCl法提取沙门氏菌及对照菌株的基因组DNA,紫外测定和电泳结果表明CTAB/NaCl法提取到的DNA的浓度和纯度较煮沸法理想。合成分别扩增沙门氏菌属特异基因hut基因(495bp)、hilA基因(490bp)、invA基因(284bp)和hns基因(152bp)的引物,对PCR反应条件进行了优化。结果表明可同时用于这四种基因检测的PCR反应条件为:94℃预变性5min;94℃变性40s,60℃退火40s,72℃延伸50s,40个循环;72℃延伸5min。 相似文献
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免疫捕捉通用引物PCR检测食品中沙门氏菌 总被引:1,自引:0,他引:1
利用免疫吸附富集结合经典PCR 技术建立免疫捕捉通用引物PCR(IC-UPPCR)检测食品中沙门氏菌。采用细菌16S rRNA 基因保守区设计特异性引物,建立通用引物PCR 技术是可行的,该IC-UPPCR 检测沙门氏菌的灵敏度最低,能检测到2 × 102CFU/ml,检测沙门氏菌属和非沙门氏菌属标准株的特异性为100%,无假阳性和假阴性出现。结果表明该方法具有简单、快速、特异性好和敏感性高等特点,并可满足大批样品沙门氏菌筛选检测的要求,适用于食品卫生监管、商品检验检疫以及临床诊断等领域。 相似文献
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为了提高食品中致病菌的检出率和灵敏度,利用免疫磁珠捕获结合经典PCR技术建立免疫捕捉通用引物PCR(IMC-UPPCR)检测食品中的致病菌.结果显示,采用细菌16SrRNA基因保守区设计特异性引物,建立通用引物PCR技术是可行的,IC-UPPCR检测致病菌的最低检测限可达10 cfu,检测致病菌的特异性为100%,无假阳性和假阴性出现.采用本方法与国标方法分别对50种不同样品进行3种致病菌检测,结果显示两种方法的符合率达100%,特异性相当.与国标方法相比,本方法灵敏度更高,并具有简单、快速、特异性好和敏感性高等特点,可以满足大批样品致病菌筛选检测的要求,适用于食品卫生监管、商品检验检疫等领域. 相似文献