人脑钠肽与人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达及其活性

目的在毕赤酵母中表达重组人脑钠肽(BNP)与人血清白蛋白(HSA)融合蛋白,并检测其活性。方法重叠PCR法拼接BNP二联体与HSA基因,插入表达载体pPIC9K,电穿孔法转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达,并对表达产物进行SDS-PAGE分析、Western blot鉴定及活性检测。结果融合基因(BNP)2-HSA经测序正确,重组表达质粒经双酶切鉴定构建正确。诱导72h,融合蛋白表达量最高,可达200mg/ml,且具有良好的反应原性,其活性为rhBNP标准品的1%。结论已在毕赤酵母中成功表达了具有一定生物活性的(BNP)2-HSA融合蛋白,为开发BNP长效药物奠定了基础。     

蛋白C系统功能调节及致血栓形成因素的研究

从人血浆和人尿中纯化了蛋白C系统各组分及抗凝血酶Ⅲ。免疫家兔产生了抗血清,氯胺T法,Iodogen法和Bolton-Hunter法制备了碘标记化合物。采用平衡法建立了放射免疫分析方法。所有方法的最低可测限均小于10μg/L,回收率在94.30％～105.22％之间,未见与因子Ⅱ和凝血酶的交叉反应。采用所建的放射免疫分析法和流式细胞技术分析了蛋白C系统在内皮细胞表面的功能表达和调节。建立了简单、可靠,适于分析APC耐性的APC-APTT方法和可明确因子Ⅴ纯合子和杂合子G1691A点突变的聚合酶链反应方法。结果表明,中国和其他地区的黄种人因子Ⅴ G1691A点突变发生率显著低于欧洲白种人,而APC耐性并不低。提示中国等黄种人群有独立于因子Ⅴ G1691A点突变以外的因子Ⅴ或因子Ⅷ突变点存在的可能或存在其他致APC耐性因素等。     

脱氧雪腐镰刀烯醇时间分辨免疫法的建立

目的：利用抗脱氧雪腐镰刀烯醇多克隆抗体及其人工抗原,采用时间分辨免疫荧光技术建立间接竞争脱氧雪腐镰刀烯醇时间分辨免疫检测方法(DON-TRFIA)。方法：以DON人工抗原(DON-BSA)包被微孔板,与DON标准或样品中的DON共同竞争结合抗DON多克隆抗体,然后用稀土离子Eu3+标记羊抗兔抗体进行示踪检测,并对建立DON-TRFIA进行方法学的考核。结果：该方法的灵敏度为0.01ng/ml,检测范围为0.01～100ng/ml,IC50为4.84ng/ml,批内、批间变异率均小于10%。不同样品添加回收实验表明小麦、玉米、啤酒、面包回收率分别为89.41%～123.2%、115.6%～123.6%、80.35%～118%、87%～92.45%。玉米样品检测结果表明DON-TRFIA与商品化DON-ELISA试剂盒结果高度相关,具有较好的一致性。结论：DON-TRFIA是目前已见报道文献中最灵敏的DON免疫检测法,具有很好的应用前景。     

苦参灵芝发酵液在2．2．15细胞中抗HBV作用

比较苦参的灵芝发酵液和苦参与灵芝发酵液的混合液体外抗乙肝病毒(HBV)的效果．用HBV DNA转染的2．2．15细胞作为模型，放射免疫法测定2种药物作用后细胞培养上清液中HBsAg和HBeAg量，计算其对HBsAg和HBeAg分泌的抑制率，用MTT法检测细胞毒性．结果表明：剂量在12．5～200μg／mL的范围内，均能不同程度地减少细胞培养上清液中的HBsAg和HBeAg量，发酵液细胞的毒作用不明显，而混合液具有一定的细胞毒作用．结果显示发酵液具有一定的体外抗HBV作用．     

对当前做好节约型高校校园规划的思考

建设节约型学校是建设节约型社会的重要组成部分.本文阐述了建设节约型高校校园规划的基本原则、重要手段和主要内容.     

黄曲霉毒素B1的高灵敏时间分辨荧光免疫分析

采用时间分辨荧光技术建立了高灵敏的黄曲霉毒素B1(AFB1)间接竞争免疫分析法(AFB1-TRFIA).以AFB1-BSA为免疫原免疫新西兰大白兔制备抗AFB1抗体;AFB1与辣根过氧化酶的联结物(AFB1-HRP)包被96孔板为固相抗原,与游离AFB1共同竞争有限的抗AFB1抗体;用稀土离子Eu3 标记的羊抗兔抗体进行示踪.该方法的灵敏度为0.01μg/L,测量范围为0.01-100μg/L,批内和批间变异分别为4.1%和6.8%,平均回收率为97.2%,与黄曲霉毒素B2的平均交叉反应为10%左右;黄曲霉毒素G2、赭曲霉毒素A、赭曲霉毒素B及HRP基本不干扰本方法对AFB1的检测.8条不同时间进行的AFB1-TRFIA的效应点值ED80、ED50、ED20分别为(0.07±0.01)μg/L、(0.63±0.02)μg/L和(12.5±0.47)μg/L.比较AFB1-TRFIA和AFB1-ELISA检测AFB1,两者的相关系数为0.917.研究表明,AFB1-TRFIA是目前报导的AFB1检测中最灵敏的方法,该分析方法稳定性好,可测范围宽,具有很好的应用前景.     

大学英语教育热的冷思考

大学英语教育热风靡全国,但是我国的学生并没有真正地从中得到乐趣与自信。越来越多的问题助长了一些负面反驳效应,如伪造证书热、枪手、涉嫌英语教师以及工作人员的丑闻等等,影响了大学英语教育的良性发展。因此,对大学英语教育热的冷思考可以探究教育中所存在的一系列问题,希望能引起关注。     

99Tcm-angiostatin的体内分布及其与新生血管作用的实验研究

本文研究血管抑素(Angiostatin,AS)对血管内皮细胞作用的特异性.采用Sncl2还原法制备99Tcm-rhAS,通过鼠尾静脉注射99Tcm-rhAS,观察其体内分布并在小鼠S180肿瘤和Matrigel模型上进行显像及放射自显影,研究AS对新生血管的作用特异性.结果显示,99Tcm-rhAS在体内通过肝、肾进行代谢;S180肿瘤和Matrigel均可特异性摄取99Tcm-rhAS.S1 80肿瘤及Matrigel模型对99Tcm-rhAS特异性摄取表明AS可与新生血管特异性结合,其抑制肿瘤的作用是基于靶向血管内皮细胞的.     

以凝血酶为血栓形成体内定位靶的放射显像条件研究

文章涉及一种凝血酶(Th)的有效抑制剂——重组水蛭素(rHHV2),评价其作为血栓形成诊断工具的可能性。采用氯胺-T法制备了I-rHHV2和I-Th,标记率分别为86.64%和62.20%,125125放化纯分别为89.70%和91.22%,比放射性分别为22.4和94.3TBq/mmol。于预包被纤维蛋白原或Th的塑料小珠上进行放射性竞争分析显示,Th-纤维蛋白复合物的形成不影响rHHV2与其上的Th结合;在rHHV2,Th和纤维蛋白原形成的三元复合物中,其分子比为14141。99mTc-rHHV2的制备采用亚氨基噻吩盐酸盐修饰法,标记率为90.81%,放化纯为93.9%,比放射性为2.30TBq/mmol,犬和兔血栓模型显像用量为30μg/kg。SPECT显像分析表明血栓清晰可见,且动静脉血栓显像结果差异明显。动脉血栓在给药后45min显像清晰,随后影像逐渐减退;静脉血栓在给药后30min开始显像,并随时间的延长影像趋于清晰。小鼠体内分布证明rHHV2主要从泌尿系统排泄。这些结果说明靶向Th-纤维蛋白复合物中Th的99mTc-rHHV2可望成为一种新的血栓显像剂。     

烟台农村城镇化与城乡协调发展研究

我国是个典型的农民大国,也是世界上城乡发展差距最为悬殊的国家之一.统计资料显示,从1984年到2003年,我国城乡居民的人均收入比已经从1.7:1扩大到3.2:1.有的学者认为,如果考虑到城市居民的各种福利性补贴,目前我国城乡居民的实际收入差距可能会达到5:1～6:1.