小球藻锌结合类金属硫蛋白的提取和分离

小球藻经60μmol/L的锌胁迫培养5天后,离心收集藻泥,经超声波细胞破碎后,离心得到上清液即蛋白质粗提液。粗提液经葡聚糖凝胶层析柱G-75及脱盐柱G-25分离、纯化后,收集的蛋白组分经真空冷冻干燥后获得小球藻锌结合蛋白。实验测定了在不同pH值下小球藻锌结合蛋白的紫外光谱特征,发现该蛋白质的紫外光谱特征与兔肝金属硫蛋白(Zn-MTs)十分相似。经阴离子交换层析柱(DEAE Sephadex A-25)及反相液相色谱分离表明,小球藻锌结合蛋白的色谱行为与兔肝Zn-MTs有一定的相似性。此外,经Tricine-SDS-PAGE法测定该蛋白质的分子量约为8.2kDa;蛋白质分子中半胱氨酸含量达15%以上。由此可见,小球藻在锌胁迫下可诱导生成与兔肝Zn-MTs相似的锌结合蛋白质,即类金属硫蛋白(Zn-MT-like)。每克鲜藻可诱导Zn-MT-like蛋白达0.2g以上。