黑豆酯酶检测氧乐果残留条件的优化

目的研究以氧乐果为代表的有机磷农药残留检测条件。方法以黑豆酯酶为酶源,a-乙酸萘酯为底物,采用酶抑制法,考察黑豆酯酶稀释倍数、显色时间、反应温度3个因素对黑豆酯酶活力测定的影响。然后通过3因素3水平响应面法优化黑豆酯酶活力的测定条件,并确定氧乐果对黑豆酯酶的最佳抑制时间和检测的灵敏度。结果当黑豆酯酶稀释倍数为18,显色反应时间为10 min,反应温度为41℃时,黑豆酯酶活力测定的吸光度值达到0.811。氧乐果抑制黑豆酯酶的最佳时间是4 min。绘制氧乐果对黑豆酯酶的标准曲线,得到最低检测限为0.1μg/mL。结论本研究获得了以黑豆酯酶抑制法检测氧乐果残留的最佳条件,其检测限低于有机磷农药氧乐果残留检测的最低限值要求(0.2μg/mL)。因此,以黑豆酯酶为酶源的酶抑制法可以作为有机磷农药氧乐果残留快速检测的一种有效手段。     

大孔树脂法纯化黑豆酯酶的工艺优化

目的对采用大孔树脂法纯化黑豆酯酶的工艺进行优化,确定其最佳工艺条件。方法首先通过静态吸附和洗脱试验,以黑豆酯酶的吸附率和洗脱率为指标,筛选最佳树脂。然后进行动态吸附和洗脱试验,研究上样稀释倍数、洗脱剂体积分数和洗脱剂体积3因素对洗脱率的影响。最后以黑豆酯酶得率和比活力为指标,用L_(16)(4~3)正交实验进行优化。结果通过筛选发现,D301R树脂吸附率和洗脱率都较高。动态吸附和洗脱实验中获得最佳工艺条件为:上样稀释倍数为40倍,洗脱剂体积分数为60%,洗脱剂用量为20 mL。在此条件下黑豆酯酶得率为(89.39±1.65)%,黑豆酯酶比活力(6.585±0.090)U/mg。结论与粗酶的纯度相比,优化后的大孔树脂法纯化黑豆酶工艺的提纯倍数达到6.143倍,为黑豆酯酶的提纯和有机磷农药残留的检测提供了科学依据。     

超声辅助双水相法提取大蒜素的工艺研究

为了探索大蒜素的提取纯化工艺,采用超声波处理和双水相体系相结合的方法提取大蒜中的大蒜素。选用新鲜大蒜为实验原料,以大蒜素的提取率为实验指标,考查聚乙二醇质量分数、硫酸铵质量分数、p H和超声时间等因素对大蒜素提取率的影响。然后采用响应曲面分析法,对聚乙二醇质量分数、p H和超声时间进行三因素三水平的优化实验,并建立了相应的回归模型。结果表明,聚乙二醇质量分数、p H和超声时间对大蒜素提取率影响显著,显著性顺序为:p H>聚乙二醇质量分数>超声时间;最佳提取工艺条件为:聚乙二醇质量分数19.4%,p H3.0,超声时间55min。在此条件下,大蒜素提取率的预测值为88.91%,实验值为88.89%±0.0112%,实验值与预测值基本相符。