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目的分离纯化杨树菇子实体中脱氧核糖核酸酶,并对其性质进行分析。方法通过80%饱和(NH4)2SO4沉淀、Blue Sepharose 6 Fast Flow、DEAE-Sepharose Fast Flow和SP-Sepharose Fast Flow层析方法,从杨树菇子实体中分离纯化一种脱氧核糖核酸酶。SDS-PAGE和活性SDS-PAGE测定相对分子质量,采用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法分析其酶学性质,并检测pH、温度、Mg2+和EDTA浓度对酶活性的影响。结果经纯化得到了一种脱氧核糖核酸酶,其相对分子质量为31000。该酶对超螺旋质粒DNA、λDNA、ssDNA和dsDNA均具有降解活性,对dsDNA的降解活性略高于ssDNA,且酶活性依赖于二价金属阳离子。该酶的最适pH值范围为7.5~9.6,50℃时相对酶活性最高。结论从杨树菇子实体中纯化的脱氧核糖核酸酶属于一种非限制性脱氧核糖核酸内切酶。 相似文献
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为构建携带水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)主要内层衣壳蛋白S3基因和外层衣壳蛋白S8基因的重组杆状病毒,将目的基因(S3和S8)分别亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacDual多角体启动子(PH)和p10启动子的下游.经酶切和确证性序列测定,将其转化到DH10Bac感受态细胞中,获得重组杆粒rbpFBDS3-S8,采用脂质体转染法,将rbpFBDS3-S8转染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)Sf9细胞包装病毒,PCR筛选鉴定重组病毒.结果表明:Sf9昆虫细胞被侵染72 h后,倒置显微镜下观察到细胞增大,培养液和细胞内出现颗粒状物质,部分细胞破裂甚至裂解,说明S3和S8基因已整合到重组杆状病毒基因组中,这为开展RGDV主要结构蛋白在昆虫细胞中的表达及其功能研究奠定了基础. 相似文献
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烟草花叶病毒强、弱毒株对烟草植株的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
分别接种烟草花叶病毒强毒株(TMV-W)、诱变获得的两个弱毒株(TMV-017、TMV-152)于普通烟(品种为K326)。间接ELISA法测定了强,弱毒株在接种叶上的增殖速率,同时考察了叶绿素a、叶绿素b,叶绿素,可溶蛋白含量的变化。实验发现强毒株在接种后第2d就可检测到,而弱毒株在第3d被检测到,弱毒株在烟草植株体内的稳定浓度低于强毒株,分别受强,弱毒株侵染的烟草叶片中的叶绿素a,叶绿素b,叶绿素含量都有所下降,但强毒株引起的下降幅度最大。受强,弱毒株分别侵染的烟叶中可溶性蛋白含量均发生变化,初期都有所升高,之后,弱毒株随着侵染时间的延长而有所下降,而强毒株下降后又有所回升。 相似文献
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福建烟草病毒种群及其发生频率的研究 总被引:8,自引:1,他引:7
1984-1991年的调查研究结果表明,福建烟区的烟草病毒有TMV-C,Tom,YM和RS株系,CMV-C,Yel和TN株系,以及TEV,TLCV,TRV,TRSV,TSV,TVBMV,ToAV,ToBRV,PVX,PVY,其中以CMV-C和TMV-C为优势株系,分别占样品总数的27.8%和27.7%。各种病毒(株系)及其发生的频率因地区和年份而有所不同。在田间各种病毒(株系)的株发病率因烟草品种、烟苗来原和前作类型不同而有差异。 相似文献
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马铃薯X病毒CP基因的原核表达及特异性抗血清的制备 总被引:1,自引:0,他引:1
依据马铃薯X病毒(PotatovirusX,PVX)外壳蛋白(CP)基因序列(711bp)设计合成了两对引物,通过RT-PCR扩增得到长0.7bp的目的片段.将目的片段转入大肠杆菌,酶切鉴定证明得到了含有目的片段的重组子,测定序列结果与其他PVX分离物CP基因序列比较,发现其核苷酸同源性最高可达99%左右,证明此病毒为PVX.构建了含PVXCP基因的融合蛋白原核表达载体,并在大肠杆菌中得到表达,SDS-PAGE测定该融合蛋白GST-XCP的相对分子质量为52000.Westemblot分析结果显示,GST-XCP与PVX抗血清有很强的免疫反应,表明GST-XCP有天然状态下病毒核衣壳蛋白的抗原性.制备了GST-XCP抗血清,并利用此抗血清建立了PVX的间接ELISA检测方法,检测灵敏度为1mg鲜重的病株叶片. 相似文献
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